紫外可见分光光度计(UV)

主题:【第三届原创】我也做个小实验,氘灯和钨灯340nm下石英比色皿和玻璃比色皿的吸光度比较

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闲鹤野云
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该帖子已被xiaoanxiaoye设置为精华;
看到周版主的帖子,也自己想看看到底340nm处有什么不同。我没有他的设备好,只好因陋就简,比划一下。

晚上吃过饭,真的做了两个试验

试验方法和结果
1. 一台紫外可见光的老设备,氘灯,在340nm处(旋钮型)比较了两个空石英比色皿(1ml)(新的,从没用过)的和两个空普通玻璃比色皿(1ml)(使用过)的吸光度,发现石英比色皿的吸光度一只在0.029,另一只在0.031,测定五次都比较稳定。而玻璃比色皿的吸光度为0.129和0.137,五次连续测定也比较稳定。
2. 使用一个可见光分光光度计,Sectrolab 22c,只有钨灯,但旋钮在330-700nm(旋钮型),选择340nm,同样比较上述同样的空石英比色皿和玻璃比色皿,吸光度分别为0.063, 0.066, 0.132,0.136。

结论:
a. 新的石英比色皿在340nm处的吸收远小于玻璃比色皿,且比二虎的石英比色皿吸光度小很多,但是否是因为我的石英比色皿是新的,而二虎的可能用过有关不清楚,也可能与我的氘灯(老氘灯)能量低有关也需要研究,但我的玻璃比色皿的340nm处吸光度与二虎的相似,说明能量也不算低。即比色皿的新旧对吸光度有影响(明显的结论,哈哈)。

b. 在使用钨灯及光栅在340nm处进行比色,石英比色皿的吸光度增加到0.063-0.066,还是比二虎的低,此时玻璃比色皿的吸光度与氘灯下340nm测定的吸光度相似也在0.132-0.136之间。
c. 一个弱弱的问题,带光栅(单色器的设备),如果只有钨灯,在330-400nm之间进行紫外检测可以么?钨灯的波长范围是多大,有紫外区段么?不想查资料了,在这里聆听大家的经验。

d. 在340nm处,不论氘灯或钨灯产生的紫外光,玻璃比色皿的吸光度都比石英比色皿的大得多,如果进行非常微量吸光度物质的测定,可能不合适使用玻璃比色皿;比色皿之间的吸光度不同,要尽量使用一只比色皿。

e. 只所以关注340nm,主要是很多检测使用340nm,如尿素氮,谷丙转氨酶等使用NADPH变化进行检测时要用340nm
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闲鹤野云
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补充一下,这里的“石英比色皿”就是石英玻璃比色皿,而“玻璃比色皿”就是普通玻璃比色皿
tutm
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你能不能再试下,将波长旋到其它波长,然后再调到340nm测,看看吸光度变化了多少,其间玻璃比色皿不用拿出来。
叶子
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ruojun老师的帖子真迅速啊,这种认真的精神值得大家学习
祥子
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原文由 闲鹤野云(ruojun) 发表:
c. 一个弱弱的问题,带光栅(单色器的设备),如果只有钨灯,在330-400nm之间进行紫外检测可以么?钨灯的波长范围是多大,有紫外区段么?不想查资料了,在这里聆听大家的经验。


钨灯的波长范围,貌似并没有一个非常确定的答案。在网上搜一个标准谱图,都难。

而且钨灯型号众多,这些钨灯在制造时是否有相同的技术标准都不一定。

所以,不同的钨灯的光谱图可能还是有些差别的。

有介绍说,钨灯最适宜的波长范围是380nm~760nm

有些仪器可以设置光源切换点,一般的都是设置为340nm,不过我记得也有设置为320nm的。

钨灯在340nm肯定是有一些能量的。

这里有一个帖子,非常好啊,还是玉虎兄的:

关于氘灯和钨等等的转换波长的选择:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20071114/1058391/
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2010/11/19 9:31:45 Last edit by nemoium
闲鹤野云
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原文由 tutm(tutm) 发表:
你能不能再试下,将波长旋到其它波长,然后再调到340nm测,看看吸光度变化了多少,其间玻璃比色皿不用拿出来。


好,抽时间再试验,分享
huacai
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氘灯钨灯的波长在340nm-360nm范围是有交叉,使用时不可以避开吗?但个人沉得,只要足够稳定可识别应不影响测定吧
闲鹤野云
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原文由 叶子(xiaoanxiaoye) 发表:
ruojun老师的帖子真迅速啊,这种认真的精神值得大家学习

谢谢叶子,有机会也亲眼看看你呢
初学者&九点虎
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ghxiang
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1\光源能量大小:对于吸光度测试,能量大小本身不影响,只是能量小了,可能有2个负面影响:杂散光效应相对变大了,光电检测器的性噪比相对下降了;
2\光源波长: 氘灯光谱非常宽,从200nm至900nm以上,但能量主要集中在紫外区;卤钨灯,属于热光源,能量主要分布在可见和近红外区域,一般上理解<350nm时,能量已经非常小了;在紫外-可见分光光度计中,需要氘灯和钨灯组合才能很好的覆盖200~900nm范围波长,并且考虑到2种光源的特性以及为避免光栅的二阶光谱和一阶光谱的重叠,会在在350nm附近切换光源,扫描式分光光谱仪在扫描至附近能听到光源切换的声音;
3\普通玻璃只能透过300nm以上的光,而石英玻璃则能透过200nm波长的紫外光,由于纯净度高,在全波长范围内的透过性比普通玻璃要略好,这也正是石英比色皿的自身吸光度比玻璃比色皿在340nm波长处的吸光度要小;
4\旧的比色皿往往由于表面磨损或者脏污,透光性会有所下降,这也正是旧比色皿比新比色皿吸光度大的原因;
5\在吸光度测定中,还有一个问题需要注意: 参比和样品比色皿构成一对,两个比色皿之间的一致性需要考虑.如果一致性不好,可能会引起小吸光度样品的测量显著误差;
该帖子作者被版主 zhouyuhu5积分, 2经验,加分理由:提供帮助
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2010/11/19 21:58:07 Last edit by ghxiang
闲鹤野云
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