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主题：【讨论】使用分光光度法定量必须选择在最大吸收波长下测定么？

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hurt1226
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发表于：2008/08/26 22:52:39 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 未解决
最近采用DNS测还原糖，国外文献中基本采用540NM，国内有520NM，可实际在做吸收曲线时发现没有最大吸收波长，是一条一直递减的曲线，很汗然，曲线在520-550nm之间下降幅度较平缓，520-480nm曲线坡度很大，在定量时必须要求在最大吸收波长下测定么？

反应体系中含淀粉，酶液，显色剂DNS（黄色），还原糖与DNS的反应产物（橘红色）——在复杂体系之下，是不是可以不采用最大吸收波长？

搜索论坛里，发现最大吸收波长的选择原理是由于两侧坡度大，波长的微小变化会导致A的大变化，如果根据这个说法，是不是在曲线较缓和的位置也可以测定呢？因为540nm的波长，国外人已经一直用了五十多年没有改过了

希望大家不吝赐教，谢谢！
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2008/8/27 9:01:16 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
恰恰相反，选择最大吸收波长测定是因为峰顶平缓，波长的微小改变对吸光度影响不大，以减小误差。依此类推，在找不到最大吸收情况下，选择曲线最平缓区域测定，也可减小误差。
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2008/8/27 10:44:50 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果用吸收系数法测定含量，必须用最大吸收波长。。。如果用对照品测量样品含量，就不一定用最大吸收波长。。。主要是减少仪器、环境、操作等方面的误差。。。。。。。
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2008/8/27 11:59:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在实际测量的时候最大吸收值和实际测定值还是会有一定差异的～

仅仅为标品的话十分好判定，而一般样品多有杂质干扰，所以为了得到最佳的检验效果，会将波长选择到更合适的位置。

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