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主题：【求助】紫外可见分光光度法定量测定问题

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bsoul
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发表于：2012/06/14 21:28:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近再做一个总多酚的含测，是显色反映，大概方法是这样的。
待测液+福林酚试剂（显色剂）+碳酸钠溶液（缓冲，提供碱性环境），蒸馏水定容，反映一段时间。765nm下测定吸光度。
由于要做条件的优化，所以显色剂和缓冲试剂的加入量成为考察因素。例如考察福林酚的加入量，设计5个水平（1.0ml，2.0ml。。。。5.0ml），其他的因素不变，测定吸光度那个最大。
问题来了 那我是不是要每个水平都做一个试剂空白，还是单单用蒸馏水来做空白。
前提是试剂空白在所测的波长下是没有吸收的。
还有一个问题，重现性比较差，就算用标准品，几次测定的结果还是浮动很大（0.59-0.62）。用的是安捷伦的8453，02年的仪器了，别人都说重现性很好，我现在都在怀疑是不是灯的寿命到了。另外这个仪器不用走基线的，单光束。
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秋月芙蓉
ljhciq
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2012/6/16 19:27:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般是用蒸馏水做空白，完成标准曲线后测定样品
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2012/6/16 20:33:56 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
那看蒸馏水时，仪器的读数是否稳定。稳定的话，那基本是样品的不稳定。

不稳定，就换个钨灯看看。
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bsoul
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2012/6/17 10:23:44 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又试了几次，重现性已经不错了应该是操作误差，或是样品不稳定。
操作误差是不是通过增大样品的量，改用较大容量瓶来测定来减小。现在用的10ml的，也没有移液器，都是用移液管的，是不是改换成50ml的容量瓶更合适一点。
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lilylau
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2012/6/29 11:02:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习下，LZ情况有展进吗
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