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液相色谱（LC）
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主题：【求助】大家帮帮忙给我分析一下，我的高效液相不出峰是怎么回事

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liupp2008china
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发表于：2010/12/09 21:50:27 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我最近开始做高效液相色谱，是用反相C18柱，示差折光检测器测定木聚糖降解产物，流动相用的是添加少许乙腈的超纯水。按照我的TLC结果，可以知道主要的是木糖，木二糖与木三糖，可能其他的低聚糖也会有，但是含量应该很低。我跑高效液相后，却只有一个峰，其他物质都没有出峰。大家有没有谁遇到这样的问题？知道是什么原因吗？确定有东西但却不出峰，各位大侠帮帮忙……在此先谢谢了。（下面附有图谱）
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2010/12/10 10:03:52 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这三个东西在你给出的色谱条件下能分离的开吗？方法是标准方法还是自己建立的？




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redrumcha
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2010/12/10 10:21:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用C18柱做糖么？似乎难分吧，看楼主的图似乎都在死时间出完了。可以尝试换换其他方法，用氨基柱或其他？
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johne0212
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2010/12/10 10:31:56 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
通常我们做单糖和聚合度小于10的多糖,都是用的正相色谱氨基柱加上RID的,你用C18柱肯定不可以的.

建议你用氨基柱,4.6*250mm,流动相水:乙晴(25:75,v/v)然后你可以看到很好的效果,另外,RID的灵敏度非常低,你如果要看到低于1000PPM以下的物质有点困难,一般做糖的LoD都在0.5 mg/ml左右(实际上柱浓度).
所以估计你看不到低聚糖的峰,想看到这些峰可以转为HPAEC-PAD方法.
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liupp2008china
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2010/12/13 12:29:49 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表: 我查了很多资料，人家大多数都用的是氨基柱或是糖柱，但是我导师这边只有反向C18柱子，我就结合资料自己选择了这样的条件，即使分不开，也应该会很多杂乱的峰吧？为什么我的峰线都是平的呢？是跑得时间不够还是什么原因呢？
这三个东西在你给出的色谱条件下能分离的开吗？方法是标准方法还是自己建立的？




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2010/12/13 12:34:35 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 redrumcha(redrumcha) 发表:
用C18柱做糖么？似乎难分吧，看楼主的图似乎都在死时间出完了。可以尝试换换其他方法，用氨基柱或其他？


前面的峰难道是溶剂峰吗？是我的东西还没出来？ 我现在就是想即使用这个柱子分不开，但只要是有物质应该就会有峰吧，在图上面应该显示的是一些杂乱的峰，而不是这么干净的。你觉得可能是什么原因造成的呢？
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2010/12/13 12:36:33 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
这三个东西在你给出的色谱条件下能分离的开吗？方法是标准方法还是自己建立的？






我查了很多资料，人家大多数都用的是氨基柱或是糖柱，但是我导师这边只有反向C18柱子，我就结合资料选择了这样的条件。  即使分不开，也应该会很多杂乱的峰吧？为什么我的峰线都是平的呢？是跑得时间不够还是什么原因呢？
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阿三
junqiwudi
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2010/12/13 12:38:08 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一个峰应该是吧 没分开
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2010/12/13 12:44:54 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 johne0212(johne0212) 发表:
通常我们做单糖和聚合度小于10的多糖,都是用的正相色谱氨基柱加上RID的,你用C18柱肯定不可以的.

建议你用氨基柱,4.6*250mm,流动相水:乙晴(25:75,v/v)然后你可以看到很好的效果,另外,RID的灵敏度非常低,你如果要看到低于1000PPM以下的物质有点困难,一般做糖的LoD都在0.5 mg/ml左右(实际上柱浓度).
所以估计你看不到低聚糖的峰,想看到这些峰可以转为HPAEC-PAD方法.


谢谢。但是我还想问一下，用C18柱子连物质峰都看不到吗？我的图跑出来是这个样子的，是不是是哪个地方出了问题，除了是柱子的原因外还有其他原因吗？  我要是不换柱子的话，想看到里面物质的峰要怎么改善一下呢，不一定要分开，只要能看到有几个峰就行了。
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liupp2008china
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2010/12/13 12:47:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 阿三(junqiwudi) 发表:
第一个峰应该是吧 没分开


你的意思是所有的峰都叠在一起了？
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sacid
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2010/12/13 14:34:15 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很有可能是峰都叠在一起了，糖类在c18柱上保留差，分离度也会很差，快就会出柱子了。
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