各位请教一个棘手的问题:
本人用毛细管环糊精电泳分离中药中的黄酮类物质,用的硼砂,β环糊精体系,ph是9..4左右。分离7个marker,包括槲皮素,芦丁,芹菜素,黄芩苷等。
如果直接用缓冲液,对照品可以分开,但是中药样品里的杂峰和待测物分不好,所以参照文献,加入了乙腈作为改性剂,效果很好,峰很尖,并且峰的保留时间延长后能够很好的分离,但是问题出现了:
1. 开始做的时候还好,慢慢的峰的重现性就很差,甚至连顺序都有差异。然后峰出现拖尾,变宽。我的乙腈的加入比例是1:4,即缓冲为4份,乙腈为1份。是否太大?
2. 出现峰变宽的情况应该如何处理?用高浓度的NAOH冲柱子?我有尝试过,但是发现效果不是很理想。
3. 进样的时候,每针之间用什么溶剂冲比较好?坛子里有人说用NAOH,但也有说NAOH不好的 ,到底如何解决?
4..如果想改善样品中各个峰的分离度,即优化条件,主要靠调节什么??(比如想改善峰与峰之间的分离度,在反相
液相色谱里面就是加大水相)
希望高手能够回答,谢谢