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主题：【第三届原创作品】小议HPLC流动相（12月）

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乐果
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发表于：2010/12/19 08:59:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为zxm-1980原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

                    小议HPLC流动相

通常在HPLC使用上，一般用的都是HPLC级试剂、用于过滤的滤膜孔径一般都要比填料的孔径小，过滤流动相、最好用真空或氦气脱气。实际上，按照不同的精确度，有时候操作需要并不是那么严格。下面简单做一下我个人见解，

1.、关于流动相使用HPLC级溶剂，我认为我们要先认识色谱纯试剂，我认为这里关键是两点：第一点色谱纯试剂纯度高、紫外吸收小。纯度高一方面，没有杂质干扰测定；第二点色谱纯试剂不会有金属离子损害纯度为99.99%以上的高纯度硅胶基质。但如果你没有色谱纯试剂，而且分析的又是很复杂的样品；那么用自己重蒸的分析纯溶剂也是可以的，当然还有一点是紫外吸收也要同时符合要求。这对于紫外吸收大的样品是足够了。如果懒得自己重蒸，也可以用些便宜的色谱纯试剂。事实上，据我所知，许多所谓的色谱纯也是国内制备灌国外品牌的瓶子卖的。

2、关于流动相的脱气，由于流动相里含有微量空气，经泵的压力作用，会在流通池里产生气泡，这对分析产生一定的影响，如噪音增大，甚至于掩盖信号峰。另外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 因此，流动相在使用前必须脱气。一般高压二元梯度泵，用超声脱气就行了。把溶剂瓶放到超声清洗机超至没有白白的气泡上来就行了（一般30min）。四元的一般是混合后脱气，比较重要，一般都会配脱气机，我没用过，不说了。如果是要求检测限很小的分析，有几点建议，第一，如果是等度洗脱，一定要改成单元等度，即流动相混合到一个瓶子里；第二，尽量用乙腈/水系统洗脱，乙腈紫外吸收小，相同条件下，噪音小很多；在前两样都解决不了，那只好通氦脱气了。使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少。

3、一般文献要求所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。但我对滤膜过滤有点个人看法，除非是无机盐，否则一般不过滤，定期把前置的过滤头取下，放稀硝酸里清洗，再用纯水洗至中性就行了。能过过滤头的东西就让它过吧，有人可能会考虑堵塞的问题，就是用了柱子该堵还是堵，如果堵了，那就洗洗塞板把柱子前面一点挖了，添上新的，就ok了，当然这里操作要小心。至于长菌，能在甲醇乙腈里长，那谁也没办法了。
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2010/12/19 9:00:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以上都是我个人的一点歪理邪说，请读到这篇文章的朋友自己做个判断，如果按我说的做，造成任何损失，我深表遗憾，但我不承担任何责任。
该帖子作者被版主 luxw加 15积分， 2经验，加分理由：版面补助2
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huaibeijiayuan
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2010/12/19 10:28:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
总结的不错，如果附上一些图片就更好了
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天涯就是天地
tianyamzn
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2010/12/19 13:42:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这样就完了？再补充点就了。
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小卢
luxw
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2010/12/19 19:24:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很简练，大家可以继续补充幺！
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2010/12/19 20:47:41 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
仔细看来，都是非常实用的一些经验，有些我也在使用啊
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wdl158160
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2010/12/19 21:09:50 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们就有一台仪器用高纯氦气来脱气，效果还行，每次泵运行前都要先用氦气脱半个小时才好，时间短了，梯度洗脱时会有气泡产生。
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小卢
luxw
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2010/12/19 22:01:57 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wdl158160(wdl158160) 发表:
我们就有一台仪器用高纯氦气来脱气，效果还行，每次泵运行前都要先用氦气脱半个小时才好，时间短了，梯度洗脱时会有气泡产生。


怎么做的？有特殊装置吗？
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杰帝贝柯化工产品
SH101785
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2010/12/20 16:20:26 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
进口HPLC试剂一般都过0.2um的膜了，所以不建议再过一次，以避免二次污染

目前的HPLC试剂基本没有对金属离子进行检测，当然量不多，不会对柱子有影响，但是如果用在LC/MS上，有可能会有影响，当然如果分析物质能与金属杂质生成金属加合物的话，那也会对分析有影响，因此这个时候可以推荐用LC/MS的专用试剂，因为一般LC/MS的试剂对金属离子会有检测和抑制

对于长菌，那就最好当天配置的试剂当天使用，或者避免阳光直晒，或者使用棕色瓶子了
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儒雅凤
liwei7893
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2010/12/20 16:31:29 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
总结得不错。
我们就用过分析纯的试剂作流动相，不过，是普通蒸馏后再用的。
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天涯就是天地
tianyamzn
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2010/12/20 18:23:29 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 杰帝贝柯化工产品(SH101785) 发表:
进口HPLC试剂一般都过0.2um的膜了，所以不建议再过一次，以避免二次污染

目前的HPLC试剂基本没有对金属离子进行检测，当然量不多，不会对柱子有影响，但是如果用在LC/MS上，有可能会有影响，当然如果分析物质能与金属杂质生成金属加合物的话，那也会对分析有影响，因此这个时候可以推荐用LC/MS的专用试剂，因为一般LC/MS的试剂对金属离子会有检测和抑制

对于长菌，那就最好当天配置的试剂当天使用，或者避免阳光直晒，或者使用棕色瓶子了
补充的不错，配制的溶液放冰箱  能放多久呢？
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