4试验步骤及标准曲线的绘制
4.1试验步骤
称取通过2mm孔径筛的风干试样ZSOg(精确至O.Olg),置于150mL带盖塑料瓶中,加入约19无磷活性炭,加入25+ 1℃的浸提剂50mL,在25±1℃的室温下,于恒温往复式振荡机上用160~ 200r/min的频率振荡30min,立即用无磷滤纸和干燥的漏斗过滤于干燥的150mL具塞三角瓶中。吸取滤液10mL于25mL比色管中,加入显色剂5rnL(小心慢加,慢慢摇动,防止产生的C02喷出瓶口)。等C02充分放出后,再以水稀释至刻度,充分摇动,加水定容。在室温高于20℃处放置30min,同时作空白试验(以10mL浸提剂代替土壤浸提液同上处理)为参比,用lCm光比色皿在波长700nm比色,以空白试验调零点,上机测定,读取吸光度值和浓度值。
4.2标准曲线的绘制
分别吸取5ug/mL磷标准溶液0mL,0.50mL,lmL,1.50mL,2mL,2.50mL,3.00mL于25ml比色管中,加入浸提剂10mL,显色剂5mLJ慢慢摇动使C02逸出再以水稀释至刻度,充分摇动,逐尽C02,定容,既为含磷0.00,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60ug/mL磷的标准系列溶液。在室温高于20%处放置30min后,进行比色,测量吸光度值和浓度值,绘制标准曲线或建立回归方程。
5结果计算
有效磷(mg/kg)=[(CxVxD)/(Mx1000)]×1 000
式中:C-从标准曲线上查得或回归方程求得显色浓度,ug/mL;V-显色液体积,25mL;D-分取倍数,即试样提取液体积/显色时分取体积,本试验为50/10;1 000-将ug换算为mg和将g换算为kg;m-风干试样质量,g。
平行测定结果以算术平均值表示,保留小数点后1位。
6精密度
平行测定结果的允许差测定值(p,mg/kg)
允许差(p,mg/kg) <10
绝对值≤0.50 10 - 20
绝对值≤1 > 20
相对相差≤5%
7注意事项
①浸提剂0.50mol/L碳酸氢钠酸度必须调节至pH值8.50,因为只有在pH值8.50时,溶液中的Ca2+、Al3+、Fe3+的浓度较低,有利于磷的提取。②严格将浸提时的温度控制在25℃,有条件的化验室最好用恒温振荡机。③如果土壤有效磷含量较高,应吸取较少量的样品浸出液,并加浸提剂补充至10mL后显色,计算时按所取浸提液的分取倍数计算。④因胶塞含磷,故浸提时振荡须用塑料瓶。
(来源:农业科技与信息2010.11)