类别		柱径/mm	备注
制备柱		> 10	生产型制备柱直径可达几十厘米
半制备柱		5～10
分析柱		2～5	典型柱为Φ4.6或Φ4 mm
微型柱	细径柱	0.8～2.0	一般柱管可为金属亦可为塑料制，如PEEK制
	毛细管柱	0.05～0.5	毛细管柱可为填充柱亦可为开管柱
	纳米柱	< 0.1	填充柱或开管柱

2、从分析物的物理化学性质入手，找出大致的色谱柱类型

选柱前应详细掌握分析物的分子量（或分子量范围）、溶解性、是否解离等信息，然后根据这些性质找到合适的色谱柱类型。

表2 液相色谱分离模式的选择

样品相对分子量	溶解性		分离模式	色谱柱	备注
小于2000	脂溶性	溶于正己烷	正相吸附色谱	Silica	填料孔径通常为100Å
		溶于四氢呋喃	GPC
		溶于甲醇/水	正相键合色谱	氰基柱、氨基柱
		溶于甲醇/水	反相色谱	C18、C8、PH或PLRP(反相聚合物色谱柱)
	水溶性	非离子型	反相色谱	C18、C8、PH或PLRP
		离子型	离子抑制色谱	C18、C8、PH或PLRP
			离子对色谱	C18、C8、PH或PLRP
			离子交换色谱	AX、CX
		低聚肽、蛋白质	反相色谱	C18、C8、C4或PLRP
大于2000	脂溶性	GPC			填料孔径通常为300Å
	水溶性	GFC
		多肽、蛋白质	反相色谱	C18、C8、C4或PLRP
		离子型	离子交换	AX、CX

对于色谱柱类型的选择有一些特殊说明：

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2011/3/20 18:34:16 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对于色谱柱类型的选择有一些特殊说明：

1.反相柱是使用最广泛的色谱柱，而ODS又是反相柱中使用最广泛的，据统计目前使用的色谱柱中超过一半是ODS柱；由于ODS柱的技术最成熟，所以具有高性能、长寿命等特点，所以选择时优先选择ODS柱；

2.对于反相柱，通常来讲，碳链越长，对化合物的保留越强，分离效果也越好，但选择短碳链的键合相可以节约分析时间；

3.反相色谱柱可以对非极性、弱极性、中等极性以及部分强极性化合物进行分离，是应用最广的色谱柱；反相色谱柱以“分配作用”保留分析物，主要以分析物在两相中的溶解性进行选择，有时不能对同分异构体和结构类似物进行分离；

4.部分解离性较弱的化合物，可通过向流动相加入酸、碱、盐的形式使分子以某种稳定并且保留性强的形式存在，然后用反相柱进行分析，这种分析方法包括“离子抑制色谱”和“离子对色谱”；

5.PLRP是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱，为反相柱，疏水性与C18相近，但不具有次级相互作用，分析碱性化合物时不会发生拖尾。

6.包括Silica、氨基柱、氰基柱在内的正相色谱柱，分别通过硅羟基、胺基、氰基与分析物中的极性基团发生极性相互作用，从而实现对分析物的保留和分离，适用于极性化合物的分离，对许多同分异构体和结构类似物也能实现较好分离。

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2011/3/20 18:34:47 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3、对填料的要求

1）填料类型普通的硅胶键合相色谱柱在流动相pH处于2～7.5范围时表现稳定，超出这一范围就会发生键合相水解(pH < 2)或硅胶溶解(pH > 7.5)等现象，因而具体到那一款色谱柱的选择时，应保证填料所能耐受的pH范围符合分析条件的要求。色谱耗材制造公司通过改进键合技术，已经制造出pH适用范围较宽的硅胶键合相色谱柱，比如Diamonsil

(2)能够耐受1.5～9的pH值，可以满足绝大多数情况下的反相色谱分析。 PLRP为聚合物基质的反相填料，由于不存在上述水解和溶解的危险，因而能够在各种PH值下使用，是目前PH值适用范围最宽的色谱柱，其主要缺点是柱效较低，重现性差、在有机相中易发生溶胀等。

2）填料粒径目前分析中大多使用粒径为1.7～5 μm的填料。根据速率理论，塔板高度与填料的粒径近似成正比，因而减小填料粒径可以得到更高的柱效，当分离效果不理想时可以考虑使用更细的填料；使用细粒径填料时，柱长可适当缩短，以提高分析速度；使用细粒径填料时，高的柱效有效抑制了色谱峰的展宽，能够获得较高的分析灵敏度；细粒径填料会显著增大柱压。分析者可根据对柱效、分析时间和分析灵敏度的要求对填料粒径进行选择。

3）填料的孔径填料的孔径对化合物的分子量具有限制。孔径为100 Å左右的填料仅能用于相对分子量不超过2000的化合物的分离，更大的分子难以进入孔内，在填料上的保留较弱，需要使用孔径更大的填料，比如300 Å。

4、色谱柱规格

(1) 内径在理想情况下，当填料、柱长和流动相优化线速度确定时，色谱柱内径的变化将只影响上样量和灵敏度，柱效、分离度、分析时间等均不发生变化。与内径为4.6 mm的色谱柱相比，内径为2.1 mm的色谱柱的截面积仅相当于前者的1/5，所以为取得相同的线速度，后者所需的体积流速仅为前者的1/5，因而使用细径柱能显著减少溶剂用量；同样由于截面积小，样品组分在细径柱中的稀释也较小，可以得到较高的灵敏度；细径柱的最大载样量也相应减小。归纳起来，细径柱的优势就在于节约溶剂，灵敏度高，与质谱检测器的兼容性更好，适用于低样品量分析，但细径柱对硬件要求更高。

(2) 长度单组份或组分较少时，用短柱即可达到较好的分离；组份较多时，则应选择长柱。当然以上只是对于最常使用的5 μm填料的色谱柱而言，如果选择了细填料的柱子，柱长可以短一些，比如，150 mm、3 μm色谱柱的柱效相当于250 mm、5 μm的色谱柱。

注：选择细内径柱或和较短色谱柱时，由于色谱柱的死体积较小，柱外效应的影响会增大，造成柱效下降。这种情况下，应选择短而细的连接管，如果有条件还可更换体积较小的进样阀和流通池。

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2011/3/20 18:35:59 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱选择实例分析

例一生育酚分析

1.jpg(6.26 K)

2009-9-7 23:44:46

生育酚共有α、β、γ、δ四种，分子结构包括苯并杂环、一个较长的碳链，其差别仅在苯环上甲基的数量和位置，其中α-生育酚具有三个甲基，β-、γ-生育酚具有两个甲基、互为同分异构体，而δ-生育酚有一个甲基。极性较弱，属脂溶性物质，同时又能溶于甲醇/水，分子量小于500，所以选色谱柱时也许有两种选择：正相柱和反相柱。填料孔径则可锁定在100 Å左右。在实际分析中，反相C18柱仅能分出三个峰（如图一）：δ峰、γ和β共同出的峰、α峰）。γ和β生育酚的差别仅在于苯环上甲基的位置不同，以“分配作用”为作用模式的C18对它们选择性基本没有差异，而所用的流动相为95%以上的甲醇水溶液(甲醇含量太低时，保留时间太长)，这种溶剂体系对这两种生育酚的溶解性也基本没有差异，所以γ-和β-生育酚在反相模式下无法分离。

2.jpg(12.75 K)

2009-9-7 23:44:46

正相的Silica柱和氨基柱则对化合物上的基团具有选择性，像γ-和β-生育酚结构上这样细小的差别就能被分辨，从而达到分离。

3.jpg(8.94 K)

2009-9-7 23:44:46

在实际分析中，C18柱常常用于常规生育酚总量测定，因为总量测定时并不需要分开γ和β生育酚；而正相柱则常用于生育酚组成的测定。在实际分析中，C18柱常常用于常规生育酚总量测定，因为总量测定时并不需要分开γ和β生育酚；而正相柱则常用于生育酚组成的测定。 例二：有机酸分析 有机酸是一类典型的可解离型有机化合物，通常具有较高的水溶性，它们的相对分子量处于几十~几百之间，因而色谱柱可以锁定在离子抑制色谱、离子对色谱或离子交换色谱，其中前两种用的均是反相色谱柱。分析这类物质时，离子抑制色谱法是最常用的方法。由于羧基的存在，有机酸的极性较强，为了使这类物质能被反相柱保留，流动相中会有较大比例的水，有时甚至用到100%水溶液；然而在水介质中有机酸会部分解离，每一种纯净物都会以两种甚至两种以上的形式存在，这是造成有机酸峰形变差的根本原因。解决办法就是将流动相的pH值设定为酸性，以抑制羧基的解离，这样化合物以单一的未解离形式存在，疏水性增强，在反相柱上的保留也增大。pH值可参考解离性最强的有机酸的pKa，通常流动相pH值比该化合物的pKa小一个数量级，就能使每种化合物得到比较完美的峰形。

例三：胺基化合物 离子对色谱(反相色谱柱)或离子交换色谱柱。

例四：蛋白质和肽 首先得到化合物的分子量范围的信息，按表2的分子量选择范围选择填料的孔径，如果不详细或范围比较模糊，则选择孔径为300 Å的填料。

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