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主题：【分享】巨噬细胞和淋巴细胞非特异性酯酶染色的方法

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发表于：2011/04/16 11:32:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非特异性酯酶
一固定液 甲醛-丙酮缓冲液(PH=6.6)
Na2HPO4  20mg，12 ， 50.39mg
KH2PO4  100mg
dH2O    30ml
丙酮    45ml
40%甲醛  25ml

固定血细胞用

二孵育液4%
1．付品红    4g
2N盐酸  100ml将付品红加入到2n盐酸中，水浴溶解过滤后，置4℃，保存备用
2．4%亚硝酸钠液
亚硝酸钠  400mg
蒸馏水    10ml
3．六偶氮付品红溶液
临用前取4%亚硝酸钠溶液3ml，边摇边滴入3ml付品红中，再充分震荡，1min备用
4．2%α醋酸萘酯溶液：取2gα醋酸萘酯溶于100ml乙二醇甲醚中，置4℃冰箱，避光保存备用
5．M/15PH7.6磷酸缓冲液
甲液：KH2PO49.08g溶于1000ml蒸馏水，乙液Na2HPO49.47g溶于1000ml蒸馏水 12H2O，23.882
取甲液13ml，乙液87ml，混合即可
KH2PO40.59g,Na2HPO412H2O 10.39g-500ml
孵育液临用前配制：取m/15，PH=7.6缓冲液89ml，逐滴加入六偶氮付品红液6ml，充分混合后，再滴入2%醋酸萘酯2.5ml，充分混合后调整pH至5.8-6.4

以下石蜡切片，冰冻切片可以用4%多聚甲醛固定，先固定与切片后固定均可

二石蜡切片
1．  将被检组织置于4℃10%中性甲醛钙溶液中固定，过夜
2．  移入4℃holt氏阿拉伯胶糖液至少24hr
3．  置于4℃50%丙酮1hr
4．  转入4℃100%丙酮24hr(换两次)，最后一次留在室温约1-2hr
5．  在二甲苯 中透明30min(换两次)
6．  56℃浸蜡30-45min
7．  切片 置于室温或37℃温箱干燥1-2hr。
8．  二甲苯脱蜡，经100%丙酮，50%丙酮各2-3min，然后进入蒸馏水
9．  孵育后步骤与血涂片同，但需经50%丙酮及纯丙酮各30s-1min，二甲苯 透明，然后封藏

holt氏阿拉伯胶蔗糖液
蔗糖30g
阿拉伯胶1g
100ml

用这个酶扩散少些。

1%甲基绿染色液

用于复染
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2011/4/17 19:33:31 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有做过相关的实验，学习了
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