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主题：【求助】请论坛前辈指教荧光定量分析

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zlovewei520
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发表于：2011/05/25 20:27:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有这么几个问题请教，
1、工作曲线如何建立？在仪器上具体如何操作。
2、分子荧光的读数很不稳定，对同一浓度的溶液荧光光强读数前后不一致，这是否正常？
非常感谢。
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2011/5/25 21:39:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.外标法做工作曲线。这与大多数分析仪器类似的，具体就是定好激发和发射波长，在一定浓度范围内横坐标的浓度和纵坐标的相对强度成正比。
2.荧光因为相应值为相对强度通常是几百上千，所以看上去比紫外吸收值波动大，还有一个原因是荧光通常是单光束仪器，要求光源及主机充分预热。并且环境特别是温度对相对强度影响很大，所以要保持恒温恒湿。另外检查是否有漏光现象
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zwyu
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2011/5/25 21:45:31 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还有一个需要考虑的因素是物质荧光本身的不稳定性。
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zlovewei520
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2011/5/25 23:04:15 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
回复两位前辈，我使用了蒸馏水做样品溶液测定的。感觉波动值比较大。想请问一下，荧光光度计的准确度和精确度如何认定？适用仪器分析的1%原则吗？还有我打算使用维生素E做样，使用水溶液可以吗？
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qz20032000
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2011/5/31 16:34:55 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
您所谓的荧光值不稳定如果是单向的，就完全有可能是样品本身的原因，而不是仪器的稳定性有问题。
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