主题：【已应助】【求助】关于hilic色谱柱分析氨基糖苷类的问题

最近在开展氨基糖苷类（包括卡那霉素\庆大霉素\链霉素\双氢链霉素\新霉素\安普霉素等）的检查，虽然有国标使用c18在做，但考虑到七氟丁酸容易污染到质谱，很是怕怕，所以就选择了hilic色谱柱。

第一次接触hilic色谱柱，遇到了以下问题:

现象：
1. 使用等度洗脱，乙腈：水=90：10，所有项目的保留时间都在2.6min附近。
2. 使用梯度洗脱，流动相还是乙腈：水，每个项目出现了两个保留时间，一个还是在2.6min附近，另一个在9min附近，两个保留时间都是在乙腈比例最高的时候出现。
3.怀疑出现的峰是色谱柱被洗脱掉的物质，使用空白水进行测试（以上标准品使用水溶解），未出峰。排除是色谱柱及液相系统的问题，说明这些峰应该是想要的标准品峰。
4.从论坛资料查询到的，有人说是用乙酸铵或甲酸铵可以，经测试，加入铵后，标准品不出峰或惨不忍睹。我使用的是10mM的浓度，不清楚是否是浓度太高的问题，但我觉得可能性不大。

疑问：
1。所有的标准品保留时间一样，非常奇怪，很是怀疑这到底是不是我要的标准品峰。
2。跑标准曲线，不成线性，甚至部分项目低浓度的感度高于高浓度的，郁闷。。。
3。保留时间无法再向后拖了，因为乙腈的比例够高了，应该再怎样改变保留时间呢？

自己也搜索了一些资料，可是还没有一个比较完善的关于HILIC色谱柱的使用方法的资料，论坛中有人说使用HILIC是可以分析这些物质的，但给出的资料或说明又难以让人信服。

所以，希望对HILIC了解或正在使用HILIC的大侠多多给点意见，如果有人确实在做这几种物质的话(使用HILIC），小生那更是感激不尽了。。。。

欢迎大家在此热烈讨论。。。

更新：在论坛上搜到了个HILIC方法开展指南，给大家分享下。

欢迎继续探讨，希望这个帖子能够成为hilic开展方法的探讨贴。。。

更新：
看了些资料，hilic色谱柱使用需要以下注意事项：
1。流动相至少需要5%的极性溶剂（如水，甲醇等）
２。流动相需要不低于４０％的有机相（如乙腈）
３。使用甲酸铵或乙酸铵能得到较好的重现性。
４。定溶液不能使用１００％的水
５。平衡时间比较长，一般需要１０倍以上的柱体积平衡

更新：
经过一段时间的测试，通过使用hilic色谱柱目前还没有得到良好的效果。
使用资生堂的一款链霉素专用色谱柱，保留特性不错，只是感度还有点差，需要再进行优化。
由于最近忙于粘杆菌素的开展，氨基糖苷类的测试需要拖一拖了，如果，谁也在做粘杆菌素，不妨也来讨论下。