一抗的孵育
1. 将膜从封闭液中取出,用PBS冲洗3次,每次10min。按照分子量将膜剪开。
2. 一抗有两种孵育方法:一、室温孵育:在桌面上铺一张纸,将剪好的膜放在纸上,加上相应的一抗。二、过夜孵育:准备夹链袋,将膜用镊子放入,但是不能碰到膜的表面,将抗体加入,不能有气泡。在室温下摇动1h(可以将枪按到一档)4℃过夜。
3. APP(1:200),Navβ2(1:200),Nav1.2(1:200),NR1(1:200),BACE1(1:1000),GAPDH(1:1000)
二抗的孵育
1. 将膜从夹链袋中取出,一抗回收放在PBST中冲洗3次,10min一次。
2. 二抗在暗室中进行,GAPDH二抗用800鼠(1:4000),其他用700兔(1:4000)。
3. 二抗孵育1h。
4. 洗膜:PBST冲洗3次,每次10min。最后再用PBS冲洗一次。扫膜。