主题：【分享】GC,LC故障排除

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沧海一粟

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发表于：2011/09/22 21:24:02 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

NPD灵敏度低的原因和处理方法有哪些？

- NPD灵敏度低，铷珠电压高或者难激发，首先检查衬管，确认衬管干净。很多情况并不是铷珠问题，而是NPD本身污染，建议清洗。此外，建议使用钢瓶气，发生器的质量很难保证。

顶空进样器的常见问题和解决办法？

- 样品瓶压不要设置的过高,大约12PSI左右就可以,压力过大会导致样品再次融入溶剂中.

- 关于残留问题：建议用水清洗。条件是：瓶温120度，LOOP和转移管的温150度，不要连接GC，反复进样几次，问题可以解决。如果还有残留一般是有固体粉粒堵塞在六通阀处。

- 进样不出峰：可以将LOOP 的平衡时间设置为0再试。如果问题解决，问题出在VENT 阀处，液体可能进入该阀,建议拆下来清洗或更换。

　

峰面积不重现，偏差太大可能的原因？
　

峰面积不重现主要问题都发生在进样口，请确认以下几点：

-一定要使用Agilent的GC进样针，特别是手动进样模式。

- 是否更换过衬管；如果换过，是否是Agilent的衬管；衬管的体积一定要900ul以上。

- 衬管里面石英棉的位置如何？分流进样模式，石英棉的位置一定要在衬管的中部，刚好接触到进样针；无分流进样模式，石英棉的位置一定要在衬管最底部。

- 清洗分流出口（需要工程师提供现场服务）

保留时间不重现的原因？
　

- 检查分析方法的设定，如果用程序升温的方法，确认要有足够的平衡时间（5分钟以上）

- 如果使用FID或NPD，请清洗一下喷嘴。喷嘴的轻微堵塞也会影响保留时间。

FID点火困难，常见原因有哪些？
　

FID点火故障是比较常见的。请检查以下几个方面：

- 确认气体的种类，连接是正确的，特别是如果换过气体钢瓶，发生器或搬过家。

- 如果换过气体，建议先用气体冲一下管路，将空气排出。

- 确认N2，H2，Air的比例（40/40/400）。

- 确认FID点火阈值设定正确。

- 确认点火时热丝是亮的，FID信号在点火时响应正常。

- 确认点火时有爆鸣声，排除气体的问题。

- 点火的热丝点亮时，在FID的点火上方用嘴吹一下。

- 建议清洗FID喷嘴。

ECD信号升高的原因和处理方法？
　

ECD信号升高的主要原因是污染，请确认一下几个方面：

- 确认是否换过载气（N2），ECD一定要使用N2 作载气，并且气体纯度一定要大于99.999%。推荐使用氦普公司（Air Products）的气体。

- 确认载气净化管是好的，建议更换新的净化管。

- 更换已经老化的色谱柱。

- 建议使用热清洗的方法清洗ECD。

FPD信号升高的原因和处理方法？
　

FPD信号升高的主要原因是污染，特别是做硫的分析。请确认一下几个方面：

- 确认是否换过载气（N2， He），H2， Air。并且所有气体的纯度一定要大于99.999%。推荐使用氦普公司（Air Products）的气体。钢瓶用的减压表一定不能有橡胶密封垫。

- 确认载气净化管是好的，建议更换新的净化管。

- 更换已经老化的色谱柱。

- 清洗FPD（需要工程师提供现场服务）。
　

GC出“鬼峰”，如何排除？
　

GC出“鬼峰”的原因很多，需要一步一步排除。

- 确认是否更换了Agilent的隔垫，O-环和衬管。

- 确认实验室更换的气体是大于99.9999%的高纯气体和洁净的空气。

- 确认实验室一定安装了相应的气体净化器（脱水，脱氧，脱有机物）。
　

如何处理 HPLC 中的盐带来的问题？

很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……

安捷伦1100及1200液相泵的日常维护？

泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1. 流动相的准备
为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2.比例阀溶剂通道的分配
四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3．过滤白头的维护
过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4．柱塞杆与柱塞密封圈的维护
柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界，工作时，它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦，使用一段时间后，会有一定的磨损，因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏，并降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。

柱塞密封圈有反相和正相之分，反相密封圈为黑色，石墨Teflon材质；正相呈橘黄色，聚乙烯材质，更适用于正相溶剂。1100/1200标配的是反相密封圈，正相应用时，需要更换为正相密封圈。

盐溶液对柱塞密封圈的寿命有着很大的影响，使用有盐溶液作为流动相的体系时，要注意盐溶液通道的清洗，千万不能让盐溶液在系统中过夜，常常一个晚上析出的盐粒就会造成系统堵塞，对泵产生较大的损害。为了延长密封圈和柱塞杆的寿命，在经常使用较高浓度的缓冲盐溶液的情况下，建议安装柱塞清洗附件。柱塞清洗的原理在于：柱塞泵在工作时，虽然有密封圈密封，但由于毛细作用，还是会有一些流动相渗入到密封圈与柱塞杆之间。如果流动相中有缓冲盐，当柱塞杆壁上的溶剂挥发掉后，极细小的盐粒留了下来。这样的盐粒就象砂纸一样磨损着柱塞杆和柱塞密封圈，会大大降低柱塞杆和密封圈的寿命。柱塞清洗附件是在柱塞杆的中间加入了一个可以有水流过的腔体，通过水不断的流动，就可以带走渗进来的盐溶液，防止了盐粒的析出，保护了柱塞杆和柱塞密封圈。通常我们往柱塞清洗的水里加入10％的异丙醇，可以减小水的张力，便于清洗液流动，并且抑制长菌。但有一点要注意的是，装有柱塞清洗附件的泵头，清洗液流量可以很小（如没分钟几滴），但一定不要让清洗通道里干涸，如果水流光了，应该尽快换上新的溶液。否则会减少柱塞杆和密封圈的寿命。

5．主动阀的维护
主动阀是流动相进入泵体的门户。如果我们发现流量为零，流量不稳，或泵压波动特别大，常常都是因为主动阀漏或是堵了。主动阀里面装有一个小的单向阀芯，我们将其取下，在异丙醇内超声清洗一下，一般能解决这样的问题。如果超声不能解决问题的话，可以更换该阀芯。对于经常使用缓冲盐体系的用户，手头常备一个这样的阀芯是非常有用的，往往可以及时解决问题，大大的降低停机带来的损失。

6．出口阀的维护
出口阀内部也有，如果有盐粒或其它杂质渗入其中，也会造成出口阀的堵或漏，常常表现为压力的异常波动。通常我们可以用异丙醇或60度左右的热水冲洗系统，如果无效，在异丙醇中超声清洗它常常会解决这样的问题。
　

保留时间重现性不好，可能的原因有哪些？

保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性，导致实验无法进行。引起这种现象因素很多，建议检查以下几个方面：
- 确认流动相是新鲜配置的，比例没有错误。
- 确认色谱柱是好的。
- 检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌，没有被堵塞。
- 如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。
- 仔细观察柱前压的变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有问题，请更换新的色谱柱试试。
- 如果是压力不稳定，一定会影响保留时间。

柱前压不稳定，压力上下波动的常见原因？
　

引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡，建议用以下的方法排除。
- 如果系统没有配置脱气机（二元泵），溶剂一定要经常超声脱气。
- 脱气机的效率不够，特别是用甲醇/水的系统最容易发生。可以将A，B通道串联；C，D通道串联用来延长脱气的时间，效果非常明显。

主动阀阀芯污染。可以将阀芯取下，用甲醇超声清洗。

为什么排气阀里的过滤芯经常堵塞？

如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高，请仔细检查一下换下来的过滤芯。正常情况下，一个过滤芯可以使用6个月左右，如果经常更换就有问题。

- 如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的，请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了，是否使用了柱塞清洗装置。缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。
- 如果过滤芯的颜色是乳白色的，非常干净。说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。请检查一下是否使用了过期的溶剂（水，有机溶剂），或质量不好的溶剂。请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水（推荐：娃哈哈纯净水）。
如果流动相经过了滤膜过滤，请确认是否使用了正确的，优质的滤膜。建议先不要使用滤膜过滤流动相，看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。
- 如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗，该通路会生长藻类，藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体，藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。如果发生了这种情况，建议用60度的热水清洗溶剂瓶，并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。
建议一定要用棕色瓶存放缓冲溶液，避光，并且定期清洗溶剂瓶。

峰面积或峰高重现性不好，偏差大，可能的原因有哪些？
　

如果HPLC系统配有自动进样器，这种情况主要是自动进样器的问题。

- 首先确认柱前压是稳定的，保留时间的重现性好。
- 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下 (默认值是200ul/min)。如果样品粘度较大，降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。
- 如果进样针或针座有轻微的堵塞，对进样精度的影响也非常大。
- 如果是手动进样器，请确认一定要使用Agilent配的标准进样针，且进样器的废液出口要与进样口水平，避免虹吸的影响。如果是满Loop进样，建议注射5倍Loop的进样体积。

自动进样器的针头或针座经常堵塞，如何处理？
　

- 如果针头或针座经常堵塞，请检查使用的进样瓶隔垫。质量不好和已经破损的隔垫易产生很多碎屑。进样时，这些细小的碎屑很容易将针头，针座堵塞。使用Agilent的正规隔垫并且经常更换旧的隔垫就可以避免这类问题。
- 如果样品是经过离心处理的，是用针头吸取上清液进样, 请将针头进样位置提高。
- 如果针头或针座发生了堵塞，可以用以下简单的办法处理：通过Chemstation诊断界面的更换针头，针座的程序将其取下，反接到泵的出口，用反吹的办法将其疏通。大部分是可以顺利解决的。
　

紫外检测器（DAD，VWD）信号波动大，噪音大，光强度检测通不过，如何处理？
　

引起这种问题的因素很多，要一步一步排除，直到找到问题真正原因。

- 确定柱前压稳定；溶剂（高纯度的有机溶剂，水）使用正确，流动相脱气良好；

- 检查检测器的氘灯是否已经到了使用寿命，是否更换过新的氘灯。

- 用异丙醇清洗整个系统，更换过滤芯，排除污染源。

- 清洗流动池和有关的透镜（需要工程师去现场服务）

HPLC出“鬼峰”，如何排除？
　

HPLC出“鬼峰” 大部分发生在反相体系（甲醇，乙腈，水），是溶剂被污染造成的。还有一种原因是进样系统有残留。

- 先运行一个空白梯度洗脱的方法，从100%水过渡到100%有机溶剂，如果“鬼峰”出现，可以判断是水被污染了（水中有藻类Algae的污染）。如果是使用纯水机制作的水，这种现象是最常见的。建议用户更换“娃哈哈” 纯净水。

- 进样系统有残留很容易判断，建议加强或改善洗针程序，延长冲洗Loop的时间。

如何查看灯的使用时间或用新灯后如何重置"0"?
　

在 ChemStation 软件的“诊断”级别中，单击检测器图标。就会看到一个下拉菜单，选择<显示模块详细信息>，然后会看到一个记事簿和扳手图标。单击此图标会看到另一个下拉菜单。选择<维护记事簿项>，然后选择“维护消息”项,查看灯的实际累加使用时间。如要换灯,选灯已更换，ChemStation 软件会提示您重新设置计数器。

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