主题：【讨论】为什么工作菌种的代数从3代开始

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发表于：2012/03/25 08:55:49 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看到一些资料上写从药检所买回冻干菌种需要传至第三代才可以用作工作菌种，我想弄明白，药典里面并没有标明必须从几代开始用，那就得考虑菌种活力，买来0代传至第二代开始保存，每次拿第二代的制备菌悬液？

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2012/4/15 9:23:38 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

百度一下：

美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至一培养基内生长，即认为已传代一次，” 并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。

实验室菌种的传代保藏过程
1. 按菌种说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。
2. 菌种鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，保藏菌种为第2代，但工作用菌种则为第三代。
3. 将第2代菌种管冷冻保存，将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的G2代菌种转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种（W3）。
5. 将第三代菌种（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2菌种经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4。
7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。
以上方法中，菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种，传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏，工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。
实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于细菌（需氧）、酵母菌的传代、保藏、对厌氧菌、真菌和芽孢类细菌则需应用其它方法。

回答者： Vanir | 五级

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