问：如何理解培养基稀释法?

答：通过增大培养基的量来稀释供试液,从而消除供试品抑菌作用常用的一种方法。

关键词：培养基稀释法

问：培养基稀释法中每皿的加菌量是多少,如何理解? 答：每皿加菌量为50—100CFU/ml的菌液1ml .原因为. ①培养基稀释法稀释的为供试液,而非菌液; ②只有每皿加1ml 菌液,每皿的菌数方能符合菌数计数规则(细菌酵母菌30~300,霉菌30~100),药典附录中所要求的菌液稀释所达到的每毫升菌落个数才有意义;

关键词：培养基稀释法加菌量

问:培养基稀释法的取液量和平皿数具体为多少?

答:以0.2 ml/皿为例,

①试验组：最低稀释级供试液0.2ml+ 1ml菌液 2个平皿 ②菌液组： 1ml菌液 2个平皿 ③供试品对照组：最低稀释级供试液0.2ml 2个平皿 ④稀释剂对照组：稀释剂0.2ml+1ml菌液 2个平皿

关键词：培养基稀释法

问：如何理解中国药典中纯化水的微生物限度检验方法?

答:⑴药典规定纯化水：微生物限度取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录Ⅺ J），细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。

⑵取样量与方法:取样量可以为1 ml或是10 ml或者其他体积,最后换算成1 ml便可.但是方法一定是薄膜过滤法.因为薄膜过滤法可以将供试液经抽虑后可以将可能存在的有抑菌作用的成分滤去,可以防止有抑菌作用的成分影响结果,常规法却不能.

⑶USP-29中关于纯化水的检验方法与检验量都没有具体规定:METHOD:“POUR PLATE OR MEMBRANE FILTRATION METHOD” ,Sample Volume:“1.0 mL minimum, －a maximum sample volume of around 250 to 300 mL is usually considered－，－when sample volumes larger than about 2 mL are needed－”.与我国药典唯一的不同就是,我们规定了方法,这也是我们的药典委员会根据我国国情所制定的具有中国特色的检验方法之一.

(4)药典纯化水正文中规定了微生物限度的方法,所以不需要大家再验证;

(5)药典中正文和附录都未要求纯化水做控制菌的检查,所以也不需要做.

关键词:纯化水微生物限度检验

问:如何理解药典附录中无菌检查检验量的问题

答:⑴检验量

①若每支（瓶）供试品的装量按药典附录表2、表3规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。每个容器装量不够接种两种培养基，检验容器数加倍。

②薄膜过滤法的检验量应不少于直接接种法的总接种量（接种两种培养基的量的和）

③只要供试品特性允许（包括溶解性，抑菌性等），应将所有容器内的全部内容物过滤。

④若由于供试品的特性（如抑菌作用太强），按要求对其供试液进行处理后，还不符合验证试验的规定，那么检验量可酌情减少，但是每支（瓶）供试品的取样量应不少于直接接种法的供试品总接种量。

⑵阳性对照试验的供试品数量

一般情况下：供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。

⑶总取样量（足够接种三份培养基）

① 批出厂检验

依据：生产量、装量、产品特性。

举例：注射剂,批（柜）生产量＞1000个

每种培养基最少检验数量 20个– 2%或20个（取较少者）

装量 ≤1 ml（全量接种）, 直接接种法 40+1=41个容器

薄膜过滤法 40+20=60个容器

装量 1＜V＜5 ml （半量接种）, 直接接种法 20+1=21个容器

薄膜过滤法 20+10=30个容器

装量 5≤V＜6 ml （接种2 ml ）直接接种法 20个容器

薄膜过滤法 20+10=30个容器

装量 6≤V＜20 ml （接种2 ml ）直接接种法 20个容器

薄膜过滤法一般产品 20+10=30个容器

特殊产品（如抑菌作用很强） 20个容器，需要时，可不全部过滤。

②上市抽验样品(略)

关键词:无菌检查检验量

问:生化培养箱、.霉菌培养箱、恒温恒湿培养箱的区别

答:1.生化培养箱主要用于生化反应的孵化,所以它们的门主要由玻璃组成,用于在特定温度孵化反应,操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化;亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养.

2.霉菌培养箱与生化培养箱大体相同,其区别在于多了一个灭菌开关,用于杀灭霉菌的孢子;

3.恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌,正如其名,其密封性好,温度和湿度都是可控恒定的,但不便于在外观察;

关键词:培养箱

问:什么情况下需要做沙门菌检查?

答:含动物组织（包括提取物）及动物类原药材粉（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给药制剂需要做沙门菌检查

关键词:沙门菌

该帖子作者被版主牛牛加 3积分， 2经验，加分理由：感谢分享

0
赞贴
3
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价

选参数看心得找厂商查方案

专属顾问快速对接

立即提交

可能感兴趣

省部重点实验室

禁止发帖修改昵称

ID：gl19860312

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/4/17 10:53:32 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问:什么情况下需要做大肠菌群检查,意义何在?

答:(1)含药材原粉的制剂需要做大肠菌群的检查

(2)大肠菌群是指在37℃生长时能发酵乳糖，24h内产酸产气的一类革兰阴性无芽孢杆菌。除大肠埃希菌属外,它还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯菌属,基本上包括了正常人畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，较大肠埃希菌更具代表性,且存活时间较长，也较容易检出。检出大肠埃希菌，一般认为药品受近期污染；而检出大肠菌群，则表示药品受近期或远期污染。以大肠菌群作为口服药品微生物限度标准的控制菌，具有广泛的卫生学意义，更能反映药品的卫生质量。国际上以大肠菌群作为药品、食品、饮水等的卫生指示菌之一。

关键词:大肠菌群

问:原料（中药提取物）及辅料的微生物限度如何检查?

答:参照相应制剂的微生物限度标准执行。

关键词: 原料微生物限度

问:微生物限度检查是否都需要取连续2-3个稀释级?

答:常规法取适宜的连续2-3个稀释级进行检查;非常规法取验证时的稀释级(最低稀释级)按验证后的方法进行检查

关键词: 微生物限度检查稀释级

问:微生物限度检查验证思路

答: 首先我们应该了解所验证品种的各成分及其药理作用，本着由易到难，由简到繁的原则选择合适的方法. 一般情况下从最简单的常规法做起，最好同时做一个培养基稀释法,培养基稀释法操作简单,菌损失率较小,成本较低,有抑菌作用品种的验证建议大家尽量采用该方法;但并不是所有抑菌作用弱的供试品都适用,如果该法的回收率仍低于70%，然后再选用薄膜过滤法、中和法、离心沉淀法等，最后再考虑联用;离心沉淀法的菌损失率较大,建议大家尽量少用.

关键词:验证思路

问:微生物限度检查中供试液的稀释级如何选择？

答:平皿法即常规法需要按药典要求"应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液";其他方法如培养基稀释法、薄膜过滤法、离心沉淀法等按验证所采用的稀释级进行检查

关键词: 稀释级

问:什么是滤膜的起泡点试验?

答:起泡点试验（Bubble-Point Tests）：滤膜起泡点是推动空气通过被液体充满的滤膜所需的压力，当压力不断增加并达到克服滤膜上较大孔中液体表面张力时，则液体从孔中流出，气泡就出来了，这个压力值即是起泡点。该测试可在水中、异丙醇、药液及其他液体中进行。测试液应将滤膜浸湿（填满膜孔），并且与滤料的实际应用液体相似。确保测试液与滤料之间的相容性也很重要，否则测试结果可能无效。

关键词:起泡点

问: 何为光复活现象?如何减少其导致的不良后果?

答: 经紫外线照射后的微生物暴露于可见光下时，可明显的降低其死亡率的现象称为光复活作用。光复活作用首先于1949年在放线菌中发现。引起的原因是可见光所激活的酶在起作用，经紫外线照射后形成胸腺嘧啶二聚体的DNA分子，在黑暗中会与一种光激活酶结合形成复合物，当再暴露在下可见光时，复合物会因获得光能而使酶与DNA分子解离，从而使胸腺嘧啶二聚体重新分散成两个胸腺嘧啶单体，同时光激活酶也从复合物中释放出来。

各种不同的微生物均由于紫外线的照射受到损伤以致死亡。但任何生物均对损伤有一定的修复能力，微生物也不例外。微生物的紫外线损伤能被可见光所逆转称为光复活，有效的波长范围包括330nm～480 nm的可见光和近紫外光。修复情况因微生物的种类和受紫外线打击的程度而异。一些缺乏光复活酶的微生物无光复活能力。紫外线的照射量增加，光复活率降低，当照射剂量达到60000μW／cm2时，大肠杆菌的光复活消失。关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，可以有效避免光复活作用的出现

关键词:光复活

问:何为高效消毒剂?

答:高效消毒剂：指可杀灭一切细菌繁殖体(包括分枝杆菌)、病毒、真菌及其孢子等，对细菌芽胞也有一定杀灭作用，达到高水平消毒要求的制剂。包括含氯消毒剂、臭氧、甲基乙内酰脲类化合物、双链季铵盐等。常用的主要是含氯消毒剂,它包括：无机氯化合物，如次氯酸钠(10%至20%)、漂白粉(25%)、漂粉精(次氯酸钙为主，80%至85%)、氯化磷酸三钠(3%至5%)；有机氯化合物，如二氯异氰尿酸钠(60%至64%)、三氯异氰尿酸(87%至90%)、氯铵T(24%)等.

关键词: 高效消毒剂

问:控制菌验证时如何消除供试品的抑菌作用?

答:对于控制菌的验证,如果常规法行不通,那我们就必须选用其他方法消除其抑菌作用.培养基稀释法中和法离心沉淀法薄膜过滤法我们都可以用.

培养基稀释法:虽然供试液的量我们不能减少,但我们可以将培养基的量增加,大肠埃希氏菌检查可以将胆盐乳糖增加至200ml或更多,大肠菌群检查可以将乳糖胆盐发酵培养基增加至20 ml 或更多,沙门菌检查可以将营养肉汤增加至400 ml,等等;

中和法即将中和剂加入到相应的的培养基中;

离心沉淀法即将离心集菌后的供试液取规定量加至相应的培养基中;

薄膜过滤法即将规定量的供试液过滤后取滤膜至相应的培养基中

关键词:控制菌验证

赞贴

拍砖

省部重点实验室

禁止发帖修改昵称

ID：gl19860312

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/4/17 10:54:26 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问：药典附录上说的菌液制备“上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每一毫升含菌数为50~100cfu的菌悬液”这一句话中，菌悬液是怎么确定含菌数为50~100cfu？

答：按10倍递减稀释法.例如取1白金饵的大肠杆菌新鲜培养物至10mL的营养肉汤培养基中培养18－24小时后；取0.1mL加入至10mL的0.9％无菌氯化钠溶液中；摇均按10倍递减稀释法稀释至10-6~10－7即取1mL，加入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，待培养基凝固后，放置于30~35度培养箱中培养，48小时后记录菌落数。既得每mL的菌落数。如果是用营养肉汤和改良马丁培养基，则培养18~24小时后，直接用培养物以10倍递增稀释，按照我们的经验：大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的培养物应稀释至10-8~10-9左右，枯草杆菌应稀释至10-5~10-6左右，白色念珠菌应稀释至10-5左右；其每1ml菌液的含菌数就在50~100个附近。如果是用营养琼脂和改良马丁琼脂斜面培养基，则培养18~24小时后，先把菌苔刮到0.9%无菌氯化钠中，黑曲霉只取其孢子，然后用细菌比浊管比浊，再按比浊后所标示的菌液浓度以10倍递增稀释至所要的浓度。取上述稀释后的菌悬液各1ml放入灭菌平皿中，（最好连续3个稀释度，每个稀释级度应做2ml）立即加入相应的45℃琼脂培养基（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌用营养琼脂，白色念珠菌和黑曲霉用改良马丁琼脂）混匀后置规定的培养温度培养，培养（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌30~35℃培养48小时，白色念珠菌和黑曲霉23~28℃培养72小时）后计数即可确定每1ml菌液含50~100个菌的稀释级别。

关键词：菌液制备活菌计数

问:如何选择中和剂及其用量?

答:中和法应特别注意所用试剂对微生物的损伤，须通过试验证明其可行性，若无报导，试验菌株的范围要广。表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响.而且所加中和剂的量也需要验证,在消除抑菌作用的前提下,越少越好,否则会造成琼脂不易凝固(加到培养基中情况)和试剂的浪费.

目前验证过的中和剂有:倍他内酰胺酶和MnSO4.

1.倍他内酰胺酶用于倍他内酰胺类药物,具体用量根据品种选择验证.

2.MnSO4用于喹诺酮类药物.

中检所在<加替沙星无菌检查验证试验>中,从FeCl3(其溶液在湿热灭菌时即浑浊,而且对细菌生长有抑制作用,所以淘汰)和MnSO4两种试剂筛选出MnSO4,用量为每筒培养基中5ml 0.1mol/L 的溶液.其原理为利用金属离子的络合作用，可以降低喹诺酮药物的活性,从而消除其抑菌作用.

喹诺酮类药物的微生物限度验证和无菌验证,我们可以直接选用MnSO4作为中和剂,但具体需要好多量,我们可以中检所加替沙星验证所用的量作为参考,寻找一个最适宜的量.

其他品种如若选用其他中和剂,都必须重新验证.

关键词:中和剂

问：PH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液和0.1%蛋白胨溶液的灭菌温度及灭菌时间各为多少？

答：PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液灭菌和普通灭菌一样(121摄氏度,0.11兆帕)

关键词：缓冲液灭菌温度、时间

问：全封闭滤器过滤为何如此的慢?

答：首先检查仪器的蠕动泵是否坏了，和滤器的密闭性是否合格

其次检查过滤的操作是否规范：过滤时，蠕动泵应该继续运作，同时滤筒上的帽子应该盖紧，利用空气的压力将供试液或冲洗液压滤下去，而不是让其自然滤过。

关键词：全封闭滤器过滤蠕动泵压力

问：净化工作台（二级生物安全柜）的初效/中效/高效过滤器应该多久清洗/更换一次？

答：初效过滤器：可以取出来清洗，清洗时从干净的一面向灰尘较多的一面冲洗，至于清洗频率，可根据实际情况制定。（个人经验：一季度1次即可）

中效/高效过滤器：维护者可定期测试其过滤性能，以尘埃粒子数/沉降菌数作为其性能指标，超出标准时则应及时更换（所以应有备用过滤器）

关键词：初效/中效/高效过滤器频率

问：菌液用注射器从过滤器上面加入，加菌液后摇均过滤成片状不能计数，可能原因

有：

答：

1.抽虑时没有抽虑干净，膜上尚保留有液体

2.加菌液后没有摇均

3.培养基中水分过多

关键词：滤器过滤成片状原因

问：对于喹诺酮类药物验证中所用中和剂的选择及其量

答：中和法应特别注意所用试剂对微生物的损伤，须通过试验证明其可行性，若无报导，试验菌株的范围要广。表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响.而且所加中和剂的量也需要验证,在消除抑菌作用的前提下,越少越好,否则会造成琼脂不易凝固(加到培养基中情况)和试剂的浪费.

对于喹诺酮类药物验证中所用中和剂MnSO4及其量( 0.1mol/L , 5ml /筒)来自中检所<加替沙星无菌检查验证试验>研究所得出的结果.

喹诺酮类药物的微生物限度验证和无菌验证,我们可以用MnSO4作为中和剂,但具体需要好多量,我们可以中检所加替沙星验证所用的量作为参考,寻找一个最适宜的量.

关键词：喹诺酮类药物验证中和剂

赞贴

拍砖

省部重点实验室

禁止发帖修改昵称

ID：gl19860312

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/4/17 10:56:34 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问：煮沸消毒法中为何加碳酸钠或石碳酸效果更佳?

答：加碳酸钠或碳酸氢钠的目的为提高水的沸点，可以提到到105摄氏度，还可以去污去锈；详细请查阅物理化学或化学手册

石炭酸又名来苏尔，本身就是化学消毒剂，可以加强消毒效果

关键词：煮沸消毒法碳酸钠或石碳酸

问:对微生物检品取样工具有什么要求？

答:微生物检品取样工具，1、一次性耗材

2、能够反复使用的耐高温、高压、不易与药品产生反应。

关键词: 取样工具要求

问：黑曲霉的传代是否和其它菌一样?我之前接好的第二代黑曲霉是白白的,呈棉絮状,用普通方法是否能够传代?请问斜面如何保持干燥？

答:黑曲霉就是这样的,前7天生长的白色物质是菌丝体,后期培养基中的营养用完了才会产生黑色的孢子～这是正常的生长状态,注意传代时的改良马丁斜面培养基要保持干燥,水分过多的话孢子颜色会偏黄.把培养基放在35℃的恒温培养箱里培养1天，应该可以去掉水分的。

关键词：黑曲霉传代干燥

我也没怎么来过帮大家整理几个吧：

问：薄膜过滤法做限度验证，药典中说冲洗量过大有可能会造成微生物的损伤，是说的供试品中的微生物吗？一般冲洗量在什么范围内算是适当呢？还有冲洗量过大会损伤薄膜而影响到最后所加菌的充分截留吗？

答：一般冲洗体积每张膜不应大于1000ml。根据我们的实验经验，实际上一种冲洗液达到500ml/膜时就已经达到冲洗极限，也就是说到500ml冲洗时还不能有效去除抑菌活性，再通过增加冲洗体积一般也无济于事，这时应考虑改变冲洗条件，比如增加冲洗液温度（45度）、添加表面活性剂（0.1％土温80等）；再不奏效，就得考虑添加中和剂。上述经验也可能与所使用的实验器材（主要是膜材质）有关。

关键词：薄膜过滤法冲洗量

问：低速离心辅料不容易离干净，还有其它方法吗？大部分需离心的片剂都不容易离干净，如罗红霉素片。

答：供试液低速离心只能解决沉降系数比较大的固体颗粒干扰，对于一些新型辅料，比如微晶纤维素等是难以奏效的。目前可尝试采用如下方法：取供试液上清液（静置、或低速离心）适量，转移到一中试管，从管口推入一小团疏松的无菌棉花，一直到液面以下，用移液管在棉花上部取液实验。

关键词：离心敷料干扰

问：开放式薄膜过滤器,滤膜应该采用什么方法灭菌

答：1，湿热灭菌法适合少量且膜尺寸会有缩小 2，钴60辐射灭菌,一张膜用一个塑料袋包好,一次去灭菌500到1000张膜,效果很好 3，购买成品已灭菌膜

关键词：滤膜灭菌

问：生化、霉菌、恒温培养箱怎么区分和选择？

答：1.生化培养箱主要用于生化反应的孵化,所以它们的门主要由玻璃组成,用于在特定温度孵化反应,操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化;亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养. 2.霉菌培养箱与生化培养箱大体相同,其区别在于多了一个灭菌开关,用于杀灭霉菌的孢子 3.恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌,正如其名,其密封性好,温度和湿度都是可控恒定的,但不便于在外观察; 总之,三种培养箱各有所长,使用者可根据自己的具体需要选择

关键词：培养箱的选择

问:为什么验证时试验组中菌液和供试液在加培养基之前尽量避免混合?

答:验证是考察供试品经所用方法处理后对微生物抑制能力的消除程度,所以在注皿前一定保证微生物是处于成活的状态, 真实地反应微生物在有营养成分的良好培养条件下(我们人体便是一个很好的培养环境)与供试品作用的结果.否则,便失去了我们验证的意义.故验证的过程中,试验组中菌液和供试液在加培养基之前尽量避免混合,然后尽快倾注培养基.

关键词:混合

问:2005版中国药典及各国药典对于回收率如何规定?

答:关于回收的限率问题,各国药典规定不同.;EP、BP、JP: 各试验菌的回收率均不低于80% ;2005版中国药典及USP：各试验菌的回收率（包括供试品组和稀释剂对照组）均不低于70%.各国设定下限都只是根据各国的实际情况和统计数据对方法所制定的一个门槛,旨在考察供试品经所用方法处理后对微生物抑制能力的消除程度.对于它的上限,根据药典委员会的专家推荐,以不超出120%为限.

答:回收率

赞贴

拍砖