主题：【原创】土壤微区pH值试验方案及改进思路

来到新公司的第一个实验任务。
这个实验在公司里是第一次做，貌似试验思路是某位专家教的，师傅也没有完整的试验方案，只口述给我如下：试验目的：观测硫磺添加到肥料中对土壤微区pH值的影响（预期结果是使土壤微区pH值下降）。操作步骤：称取土壤50克于培养皿中，加水12.5毫升，混合均匀，放置两天（这两天中经常监控，发现土干了就补充水分），两天后在土壤中心挖一个小坑  ，加0.02g肥料样品（尿素与硫磺按不同比例混合），再放置一天，一天后配置7.5kg/L的琼脂溶液，内加石蕊指示剂，每个培养皿中加50毫升琼脂溶液。待其冷却凝固后，进行长期跟踪观察（约2周）。以上试验设酸性土和碱性土两组。

失败过两次后，发现一些细节必须注意：1，不能为了将土与水拌匀而使用玻璃棒等工具搅拌，那会使得土壤表面凹凸不平，后面加琼脂时分布就不会均匀，根本无法观察颜色的变化。而应该在加水前用工具将土壤表面压平，加水时缓慢滴加，给水充足的时间下渗，避免在土壤表面冲出小沟。2，土壤本体尤其是碱性土颜色较深，难以观察指示剂颜色，我想在加琼脂之前在土壤表面覆盖一层滤纸，不知道大家认为可行否？

关于指示剂，师傅说本来要用溴甲酚紫做指示剂，经查其变色范围为5.2-6.8（黄色-紫色），但是试验室没买这个指示剂，就用石蕊指示剂代替了，石蕊指示剂的变色范围是5-8（紫色-蓝色）。我这几天一直在捉摸这个事，初步思路如下：首先，石蕊指示剂的变色范围太宽了点，而据文献报道，硫磺使土壤pH下降的数值在0.5个单位的样子，石蕊指示剂很可能识别不出这样微小的pH值的变化。其次，本试验中指示剂的作用，类似于酸碱中和滴定中指示剂的作用，比如用碱滴定酸时使用的酚酞指示剂，这样的试验有一个特点：预先掌握了体系的酸碱性及其变化趋势。而本实验中，理论上是不确定土壤微区是要变酸还是变碱的（尿素水解成氨的作用和硫磺的酸化作用哪一个更强尚不知晓），就有可能出现这样的情况：以碱性土用溴甲酚紫指示剂为例，尿素水解产生的氨使微区pH值升高，假设此时微区的pH值达到了9，则琼脂显紫色，几天后硫磺在微生物作用下生成酸，使pH下降了0.5个单位，此时微区的pH为8.5，琼脂仍显紫色。结果没有检测到实际上已经发生的pH值的变化。

结合前面liu999999老师的启发，我认为应该使用混合指示剂为佳，最好是遇到酸碱都变色的。我的办法是把pH试纸的边角料放到配好的琼脂溶液中，把混合指示剂洗下来用，先只拿了一个培养皿看看效果。初步认为有效果，现在观测到了颜色变蓝，也就是呈碱性。

希望高人指点一下，我这个思路对不对？