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主题：【讨论】蛋白污染的C18柱，怎样清洗好呢？

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xuanleer
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发表于：2012/06/28 19:58:06 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质，所以清洗能力是不强的。那么其他的方法呢？
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2012/6/28 20:00:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很多情况下，用有机溶剂、缓冲液和酸,有时还加上离子对试剂等组成的配方清洗效果不错，但是每个物质的作用是什么，加这些的原理是什么?
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xuanleer
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2012/6/28 20:00:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
清洗用的流动相配比呢？按照样品中蛋白的含量自行调整吗？
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2012/6/28 20:04:13 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还有一点，蛋白的样品，一般都是水溶性很好的，流动相中水相比例是很高的，我猜测为了印制蛋白的电离，经常流动相中还要加缓冲盐调PH，这样的话，对于不能耐受纯水的柱子，无疑是个重创啊。所以比较好奇，做蛋白样品的话，平时是如何保养柱子的？
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happy爱米粒
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2012/6/29 18:40:53 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
生物样品污染的柱子的清洗方法
1%的乙酸水溶液
1%的三氟乙酸水溶液
0.1%四氢呋喃/正丙醇= 40/60（需降低流速）
三乙胺/正丙醇= 40/60（混合前用磷酸调pH至2.5）
或者：将色谱柱反转，与检测器断开，用5倍柱体积的100%异丙醇清洗，然后使用3~5倍柱体积的二氯甲烷，3~5倍柱体积的异丙醇，最后再返回原始的溶剂体系
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上海安谱
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2012/7/6 10:02:07 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 木有才(xgy2005) 发表:
生物样品污染的柱子的清洗方法
1%的乙酸水溶液
1%的三氟乙酸水溶液
0.1%四氢呋喃/正丙醇= 40/60（需降低流速）
三乙胺/正丙醇= 40/60（混合前用磷酸调pH至2.5）
或者：将色谱柱反转，与检测器断开，用5倍柱体积的100%异丙醇清洗，然后使用3~5倍柱体积的二氯甲烷，3~5倍柱体积的异丙醇，最后再返回原始的溶剂体系

木老师，方法是哪里来的？有没有问题？
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tangtang
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2012/7/6 19:24:26 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看看色谱柱的说明书，有再生的程序的。
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happy爱米粒
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2012/7/8 14:40:18 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 上海安谱(sh100959) 发表:
原文由 木有才(xgy2005) 发表:
生物样品污染的柱子的清洗方法
1%的乙酸水溶液
1%的三氟乙酸水溶液
0.1%四氢呋喃/正丙醇= 40/60（需降低流速）
三乙胺/正丙醇= 40/60（混合前用磷酸调pH至2.5）
或者：将色谱柱反转，与检测器断开，用5倍柱体积的100%异丙醇清洗，然后使用3~5倍柱体积的二氯甲烷，3~5倍柱体积的异丙醇，最后再返回原始的溶剂体系

木老师，方法是哪里来的？有没有问题？


安谱老师好，这是参考别的厂商的培训资料，没试验过，如果不放心，酸的浓度可以放低一些，呵呵
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xuanleer
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2012/7/8 23:16:16 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 木有才(xgy2005) 发表:
原文由 上海安谱(sh100959) 发表:
原文由 木有才(xgy2005) 发表:
生物样品污染的柱子的清洗方法
1%的乙酸水溶液
1%的三氟乙酸水溶液
0.1%四氢呋喃/正丙醇= 40/60（需降低流速）
三乙胺/正丙醇= 40/60（混合前用磷酸调pH至2.5）
或者：将色谱柱反转，与检测器断开，用5倍柱体积的100%异丙醇清洗，然后使用3~5倍柱体积的二氯甲烷，3~5倍柱体积的异丙醇，最后再返回原始的溶剂体系

木老师，方法是哪里来的？有没有问题？


安谱老师好，这是参考别的厂商的培训资料，没试验过，如果不放心，酸的浓度可以放低一些，呵呵


感觉是再生的方法。
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xuanleer
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2012/7/8 23:19:50 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
试了一下百分之十的三氟乙酸水溶液比90的乙腈，反向低速冲柱子过夜，不接检测器，结果柱子好了，不再分叉。
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52nimo
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2012/8/4 18:08:53 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
反正做蛋白实验时用的流动相加的三氟乙酸
加三氟乙酸后就是要调下PH 不然太低了
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手机版： 蛋白污染的C18柱，怎样清洗好呢？
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