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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【求助】紫外结果不合适，求问题所在

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aghos
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发表于：2012/07/03 17:31:52 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前几天测了几个紫外，样品是还原型谷胱甘肽溶解在PB缓冲液中，浓度40μg/ml。但是结果很不合适，感觉全是末端吸收，而且在200~214nm透过率直接为0%，减小浓度后作用也不大。
是否与比色皿质量有关，
空白比色皿吸收
谷胱甘肽 透过率 40μg/ml 和1μg/ml
谷胱甘肽 吸收 40μg/ml 和1μg/ml
求高人解答，是什么问题，做过几个其他样品，结果也都相似，峰型都是逐渐上升状。
标准的谷胱甘肽检测貌似是在0.1mM NaOH中进行的，在214及230有两个峰，我也试过，结果与在PB缓冲液中没有区别。
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2012/7/4 8:11:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看你的谱图，应该是属于样品自身吸收
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2012/7/4 8:30:46 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是仪器出问题了？换个其他样品试试？
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2012/7/4 10:51:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又换了几个样品试了下，发现同样的问题，扫了下基线发现扫不平，具体怎么解决还不知道。
上一张图，
甲醇为空白autozero，然后测定空白甲醇的吸收
自上而下 依次为150μg/ml 阿司匹林 75μg/ml  15μg/ml 溶剂均为甲醇 及空白甲醇吸收


以前都是扫500~600的，扫了几次都以为是样品处理的不好。样品浓度很小的时候峰型与上图基线基本重合，增大浓度后一些紫外吸收强的基团在300nm可以看得见吸收峰，300nm以下就会出现毛刺，透过率0%。

是不是仪器问题？导致200~300nm的数据不可用？
谢谢各位的解答
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aghos
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2012/7/5 10:19:30 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢诸位的解答，问题解决了。
原因是我自己对仪器不熟悉，导致在检测过程中空白扣除的不合适。
今天重新测了，把空白口合适了之后，测得谱图很不错，样品浓度低点就能用了。

看来以后结果不合适还是要先从自身找问题。。。仪器一般还是比较稳定的。
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夕阳
anping
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2012/7/5 11:16:42 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怕是氘灯坏了吧？
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