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主题：【讨论】【全民抗日,国货当自强】月旭SEC柱有奖竞答（第五题）

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xue2009
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发表于：2012/09/23 10:47:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


对于这款UltimateSEC柱(亲水硅胶蛋白柱)，为什么药典规定在分析时水相中一般会加缓冲盐？加入缓冲盐对目标物分离有什么优点？

提示：可以从加入缓冲盐对样品自身的作用和对UltimateSEC柱色谱柱填料的影响来回答。大家最好不只答缓冲盐在液相色谱中分离的通用作用。

答案：

1）因为蛋白，多肽，酶等生物大分子都是两性的目标物，因而在流动相中加入缓冲盐可以使目标物以一种形式存在，这样在分离的过程中就能获得较好的峰型和分离度；

2）缓冲盐离子和Ultimate SEC柱填料二醇基和发生作用(静电引力，缔合等作用力)，可防止硅羟基对目标物的死吸附作用，因而使得目标物的分离效果更加理想，也便于获得较为理想的色谱峰峰型。

综合判断：24楼回答最为全面，因而该版友获胜，奖励一个，恭喜他！大家也继续努力哦！呵呵

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2012/9/23 10:54:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
Ultimate® SEC填料采用独特的化学键合技术，在硅球表面键合了亲水性聚合物以及亲水性二醇基官能团。双重键合机制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物样品的非特异性吸附极小，因而可广泛应用于水溶性聚合物及生物大分子的分离和测定。
该生物碱应该是偏碱性,流动相偏碱性可以减少电离,增强保留,提高分离度。从而提高观察效果及精确度。形成缓冲盐，改善峰型，氨基柱分析生物碱可能是由于有N原子，亲和力较好。现在生物碱在酸性条件下也有很好的峰型
会改善峰形，减小峰宽，抑制拖尾，塔板数自然提高。
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2012/9/23 11:24:33 Last edit by yu3226033
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2012/9/23 10:54:57 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
SEC色谱柱是硅胶基质的体积排阻色谱柱，也可以称之为“球状蛋白亲水改性硅胶柱”（中国药典门冬酰胺酶指定色谱柱）。其色谱填料为高纯度、具有良好稳定性的硅胶微球表面键合亲水性聚合物。月旭公司采用特殊的表面修饰技术，确保了该填料具有良好的稳定性和批与批之间的重现性。
对于样品来说，有些容易离解的物质，我们通过加缓冲盐，可以抑制样品的离解！有很好的保留！也从而改善了峰型！
对于固定相来说，因为不同的厂家对柱子的封尾的技术不同，导致的是不同的型号的柱子的硅醇基的性质不同，有的是缔合硅胶，硅醇基的极性小，有的是自由硅醇基，极性较大，他们因为封尾的基团不同，方法不同，导致残留的硅醇基的树木等的不同。加缓冲盐，可以抑制柱子中硅醇基与易离解的物质间的离子交换，导致峰拖尾等！对固定相，缓冲盐对他们都有作用，只是看在不同情况下，哪个占优势而已.
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2012/9/23 11:12:39 Last edit by yu3226033
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2012/9/23 10:56:08 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有机溶剂主要是起到洗脱的作用，样品能在柱子里完全被洗脱主要还是有机溶剂的作用，而使样品能在柱子里面保留时间延长主要是水相的作用，分离是有机相和水相与柱子的固定相三者的共同作用（分配作用），而水相中的缓冲盐，主要是起到抑制样品解离的作用，使样品成分子状态，峰型较好，一般是酸样加酸，碱样加碱，也就是我们理论上常说的PH要控制在PKA加减2以外。
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yu3226033
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2012/9/23 10:59:21 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2－7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2－7之外时，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰，捡出限，以及获得稳定的保留时间十分重要
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arvid2007
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2012/9/23 11:04:02 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
水相中的缓冲盐，主要是起到抑制样品解离的作用，使样品成分子状态，峰型较好。
加入缓冲盐对目标物分离有改善峰型（有些很难分离的物质使用缓冲液后分离非常漂亮），减少峰拖尾，改善分离度。

在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰，捡出限，以及获得稳定的保留时间十分重要
（一般是酸样加酸，碱样加碱，也就是我们理论上常说的PH要控制在PKA加减2以外。）
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2012/9/23 11:06:34 Last edit by arvid2007
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2012/9/23 11:04:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缓冲盐提高离子强度
缓冲盐很多时候可以改变峰形和分离度
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2012/9/23 11:29:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
使用缓冲盐调节pH值，可以提供这样一个使样品稳定的环境，便于分析。

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2012/9/23 11:35:26 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。
反相高效液相色谱中缓冲体系PH值的选择在反相高效液相色谱分析中，选择正确的缓冲液PH值，对可离解的化合物分析的重现性十分重要，不恰当的PH值可能导致不对称峰，宽峰，分裂峰或肩峰，而尖锐的，对称的峰是定量分析中获得低的检测限以，两次分析之间较低的相对标准偏差（RSD）和保留时间的高重现性的前提。
简单来说就是让化合物在最稳定的状态下得到分离，保证良好的峰形和可重复的保留时间。使用缓冲盐之后的仪器处理，不当处理损坏仪器和色谱柱。
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yu3226033
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2012/9/23 11:39:43 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
加缓冲盐可以调剂PH值，增加保留时间，美化峰型
另外用离子对试剂才可以将特定的物品分离

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fengmo4668
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2012/9/23 21:30:14 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
加缓冲盐，可以起到抑制样品解离的作用。
通过对流动相pH的调控，使保持一个稳定的离子强度，使样品保持分子状态，得到良好的峰型，改善拖尾的状况。
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2012/9/23 21:48:48 Last edit by fengmo4668
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