基因治疗剂pUDKH的分析与质量控制
【英文题名】 Analysis and Quality Control of Genetherapeutic pUDKH
【作者中文名】 刘佳;
【导师】 王正平;
【学位授予单位】 哈尔滨工程大学;
【学科专业名称】 应用化学
【学位年度】 2004
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 哈尔滨工程大学
【网络出版投稿时间】 2005-01-04
【关键词】 pUDKH; 质粒DNA; 超螺旋DNA;
液相色谱; TritonX-100; RP-HPLC; 分析;
【英文关键词】 plasmid pUDKH; supercoiled; HPLC; Revered-phase high performance liquid chromatography; Triton X-100; Quantitation;
【中文摘要】 质粒DNA作为基因治疗剂受到研究者的重视和深入的研究。质粒DNA作为基因载体比较安全、使用方便,但质粒DNA在靶细胞中的基因表达效率低、持续时间短。pUDKH是自行构建的携带HGF的重组质粒,能够促进血管生成。实验目的:对基因治疗剂质粒pUDKH的质量进行分析及质量控制。实验方法:采用阴离子交换色谱法监测质粒生产过程和质粒产品中超螺旋pUDKH的比例,所用的色谱条件为:色谱柱Tsk-gel DNA-NPR[0.46cm(id)×7.5cm(1)];流动相20mmol/L Tris-HCl,1mol/LNaCl pH8.8梯度洗脱。 质粒pUDKH生产过程中需加入去污剂(Triton X-100)溶液,随后需除去这些物质,并检测其在最终产品中的残留含量。方法 用反相
液相色谱测定质粒产品的Triton X-100含量,色谱系统包括C_(18)色谱柱HYPERSIL ODS2(250×4.6mm),洗脱溶剂为乙腈:水=70:30(V/V),流速:1.0ml/min,进样量10μl,检测波长223nm。结果 回收率为100.19±4.23,日内精密度为4.36%,日间精密度为4.17%,Triton X-...