323.3 水稻基因组DNA总甲基化水平测定方法
【作者】 陈强; 辛士刚; 王俊伟; 徐昕; 李莹; 李雪梅;
【Author】 CHEN Qiang1,XIN Shi-gang1,WANG Jun-wei2,XU Xin1,LI Yue-ying3,LI Xue-mei3(1.Experimental Center,Shenyang Normal University,Shenyang 110034,China;2.College of Engineering,Shenyang Normal University,Shenyang 110034,China;3.College of Chemistry and Life Science,Shenyang Normal University,Shenyang 110034,China)
【机构】 沈阳师范大学实验中心; 沈阳师范大学工程技术学院; 沈阳师范大学化学与生命科学学院;
【摘要】 对高效
液相色谱法测定DNA总甲基化水平的关键因素进行研究,即基因组DNA的提取及纯化和高效
液相色谱条件的选择。结果表明:CTAB法Ⅰ提取和纯化效果优于CTAB法Ⅱ;较优高效
液相色谱条件为:采用Diamonsil C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)的色谱柱,以甲醇-10 mmol/L磷酸二氢钾(10-90,v/v)为流动相构成,流动相pH为4.7,流速为0.5 mL/min,柱温为30℃,紫外检测器波长为285 nm时,是分离胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的较优条件。以试验优化的DNA提取方法和HPLC色谱条件,基因组DNA水解液的胞嘧啶(C)和5-甲基胞嘧啶(5 mC)可得到较好的分离效果。 更多还原
【关键词】 DNA甲基化; 高效
液相色谱法; 5-甲基胞嘧啶; 胞嘧啶; 流动相;