一、背景
国标GB/T 22509-2008中利用22g的氧化铝柱进行油脂中的苯并(a)芘测定的前处理,利用氧化铝吸附油脂,通过80mL的石油醚或正己烷进行洗脱苯并(a)芘。该方法使用溶剂多,操作时间长,而且氧化铝对某些油样的净化效果较差。
本实验利用Cleanert BAP-3固相萃取柱萃取油性样品中的苯并(a)芘,然后再用二氯甲烷洗脱的方法,开发了一套油脂中苯并(a)芘检测的新方法,相对于国标GB/T 22509-2008的方法,具有更佳的油脂去除效果、稳定的苯并(a)芘回收率,溶剂用量更少更环保,方法也更简便。
二、实验方法
2.1实验试剂及标准品
正己烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH216),二氯甲烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH300),乙腈(色谱纯,4L/瓶,P/N:AH015-4)
苯并(a)芘(100mg/瓶,P/N: B1760)
2.2实验仪器及耗材
Agilent HPLC,配荧光检测器,氮吹仪,超声仪,移液枪,PTFE滤头0.22μm(P/N:AS041320-T)。
连载。。。。。。
(1)使用正己烷配制200ppm苯并(a)芘标准品标样备用,并用正己烷稀释成1ppm苯并(a)芘工作液备用。
(2)取0.5g油于12mL样品瓶(P/N:1509-1800和P/N:1515-1748)中,加3mL正己烷涡旋震荡溶解,作为待净化液,若要做加标实验,根据需要向油中先加入适量的标准品。
3.2固相萃取方法
固相萃取柱名称:Cleanert BAP-3 (P/N:Bap5006);
(1)针对花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油,固相萃取方法如下:
Ø 活化:5ml二氯甲烷,5mL正己烷;
Ø 上样:将3.1中的待净化液上样到Cleanert BAP-3柱上,然后再用2mL正己烷润洗样品瓶,然后也上样到柱上;
Ø 淋洗:10ml正己烷;
Ø 洗脱:5ml二氯甲烷,收集于20mL玻璃瓶(P/N:AV7100-7和P/N:AV7920-0)中;
Ø 浓缩:将样液在40℃下氮气吹干,用1mL乙腈定容,超声10s,过PTFE 0.22um滤头,收集于1.5mL样品瓶(P/N:1109-0519和P/N:AV2100-0)的内插管(P/N:0609-0357)中,待测;
另取1mL加标浓度的标样(正己烷溶)40℃吹干1mL乙腈定容,作为液相检测时用的参考标样。
(2)针对香油,需要在Cleanert BAP-3柱上串联一只Cleanert Si硅胶固相萃取柱(500mg/6mL,P/N:Si5006),按照(1)中的方法进行活化、上样,注意淋洗时先用5mL正己烷淋洗串联柱,然后弃去硅胶柱,再用5mL的正己烷二次淋洗Cleanert BAP-3柱,最后按照(1)中的方法对Cleanert BAP-3柱进行洗脱和浓缩。
3.3液相色谱法检测条件
色谱条件:
色谱柱:Venusil ASB-C18,4.6mm×250mm×5.0µm(P/N:VS952505-0);
流动相:乙腈:水 88%:12%;
流速:1.0mL/min;
进样量:20µL;
柱温:30℃;
荧光检测器:发射波长406nm,激发波长384nm。
苯并(a)芘含量按下式计算:
其中:
w为样品中苯并(a)芘含量,单位为µg/Kg;
c为从标准曲线得到的待测液中苯并(a)芘的浓度,单位为µg/L;
V为最终定容体积,单位为µL;
m为称取的油样品质量,单位为g;