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主题：【原创】ZIC®-HILIC 色谱柱检测可乐饮料中的甲基咪唑

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默克
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发表于：2013/08/14 11:19:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

默克密理博应用实验室 2013-07-15



近日，百事可乐的产品在美国10个州中被爆出4-甲基咪唑(4-Methylimidazole)严重超标。4-甲基咪唑是一种有机中间体，主要用于合成大宗胃药西咪替丁，也可用作环氧树脂固化剂和金属表面防护剂等。可乐中的4-甲基咪唑是在以亚硫酸铵为原料生产焦糖色素时产生的。 4-甲基咪唑白色至类白色结晶粉末，易溶于水和乙醇，有腐蚀性，是一种能诱发肿瘤的化学物质。




默克密理博致力于分析方法的开发，为客户提供简便、快速的解决方案。4-甲基咪唑及其异构体2-甲基咪唑均有较强极性，适合使用默克密理博的两性离子型亲水作用色谱柱(ZIC®-HILIC)分离。

本实验采用默克密理博两性离子型（ZIC®-HILIC）色谱柱直接分析甲基咪唑的液相色谱方法。该方法前处理简单，不需要衍生化，也不需要添加离子对试剂。

1 材料试剂

1.1  对照品：4-甲基咪唑，2-甲基咪唑。

1.2  色谱柱：ZIC®-HILIC 250-4.6mm 5um 200Å（默克密理博，货号：1.50458.0001）

1.3  乙腈（默克密理博，货号：1.00030.4008）

1.4  甲醇（默克密理博，货号：1.06007.4008）

1.5  磷酸二氢钾（默克密理博，货号：1.04873.1000）

1.6  可口可乐及百事可乐样品

1.7  实验用为为超纯水（默克密理博Milli-Q Advantage）

1.8  PVDF0.22um针头过滤器（默克密理博，货号：SLGV033NB）

1.9  标准溶液配制：使用70%乙腈溶液，分别配制1mg/ml的4-甲基咪唑，2-甲基咪唑对照品原液。取两个对照品原液，1：1混合、稀释、定容，成，得100ug/ml的混合对照品母液。混合母液用70%乙腈溶液配制浓度为0.1-10ug/mL的标准工作液。

1.10              样品前处理：取3 ml 可乐饮料样品于5mL容量瓶中，用碱液调节pH值，加水稀释至刻度。混匀，取1mL溶液于10mL容量瓶中, 加8ml 乙腈溶解，超声10min后，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度。混匀，静置，分层，取上层清液，过滤。另取3ml可乐，加入标准品后，调节pH值，再同法处理。

2.测试条件

2.1 液相色谱仪：Agilent 1260 HPLC

2.2 色谱条件

色谱柱:ZIC®-HILIC PEEK 250-4.6 5um(1.50458.0001)

流动相: A-磷酸缓冲盐（20mM K2HPO4)，B-乙腈

梯度程序：0-12 min 80% B; 12-15 min 80-50% B, 15-20 min 50% B, Post time: 7 min

检测波长：214nm

柱温:30℃

流速:1mL/min

进样体积: 20ul

3 测试结果

3.1对照品测试

对照

图1混合对照品溶液(10ug/ml)



表1 对照品测试结果



No.

Compound

Retention Time (min)

Theoretical Plates

Asymmetry

Resolution

RSD %

（n=3）

1

4-Methylimidazole

10.1

7135

0.80

-

2.37

2

2-Methylimidazole

11.4

7857

0.79

2.46

1.44



3.2 校准曲线

配制0. 1，0.5，2，5，10ug/ml的对照品溶液，分别进样检测。根据浓度与峰面积值绘制校准曲线。



图2 校准曲线



结果表明，在0.1-10ug/ml之间，线性关系良好。

3.3 加标回收及精密度试验

百事可乐样品按照样品处理方法处理，结果显示未检出甲基咪唑，且在4-甲基咪唑和2-甲基咪唑色谱峰附近没有干扰峰。




图3 百事可乐样品



取3mL百事可乐样品，分别加入不同量混合对照品，经过处理后测定，计算加标回收率，见表3。




图4样品加标（蓝色为可乐空白，红色为可乐加标（17ug/ml））



表2 加标回收及精密度实验

     

加标浓度（ug/ml）

回收率

RSD

1.7

111.9%

4.3%

17

94.9%

1.2%

83.3

95.4%

1.3%



3.5 可口可乐样品测试



取可口可乐，按照方法处理，检测。结果显示未到甲基咪唑。




图5 可口可乐样品的测试图谱



4 结论

采用ZIC®-HILIC色谱柱，直接分析可乐样品中的4-甲基咪唑和2-甲基咪唑。方法在0.1-10ug/ml范围内线性关系良好，操作简单，重现性良好。

附：LC-MS/MS测试食品中的甲基咪唑




附图：ZIC-HILIC-MS/MS测试MRM扫描图谱（20ppb）



色谱柱推荐

应用



描述

订货号
HPLCZIC®-HILIC PEEK 250-4.6 5um1.50458.0001
LC/MSZIC®-HILIC PEEK 150-2.1 5um1.50454.0001


更详细信息请联系默克密理博。
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2013/8/19 10:37:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个柱子我用过，挺好用的。谢谢方法的分享
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waj_joe
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2013/8/21 13:43:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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