主题：【第六届原创】大黄酚微囊溶出度测定

                                    大黄酚微囊溶出度测定

试验目的：
    大黄酚(Chrysophanol,Chry)的化学名为1,8-二羟基-3-甲基蒽醌。大黄酚具有抗菌、缩短血液凝固时间、止咳、利尿、抗癌作用，延缓衰老，清除氧自由基，增强抗氧化能力和改善学习记忆障碍等作用。但是大黄酚具有味苦、难溶于水、遇光易氧化，对胃有一定的刺激性等不利因素。药物微囊化后，可以掩盖药物的不良气味、提高药物的稳定性，防止药物在胃内失活或减少对胃的刺激。有卮蠡品游⒛?Chrysophanol microcapsule,Chry M)的研究国内外尚未见报道。本实验对大黄酚微囊的体外溶出度进行了研究。方法：采用UV法对大黄酚微囊的体外溶出度进行考察。结果：以0.5%十二烷基硫酸钠的人工肠液为溶出介质在 255nm处测定大黄酚微囊溶出度，结果表明微囊可缓慢释放大黄酚，延长大黄酚的作用时间，提高其疗效。

结论：
    本实验建立的大黄酚微囊溶出度的测定方法操作简单、快速、灵敏、准确，结果可靠。

简介：
    大黄酚(Chrysophanol,Chry)属单蒽核类蒽醌衍生物，具有抗菌、缩短血液凝固时间、兴奋神经、麻痹肌肉、止咳、利尿、抗癌作用，并有实验表明，大黄酚能延缓衰老、增强抗氧化能力和促智作用。但是由于大黄酚味苦、性质不稳定，遇光易氧化分解，并且其对胃有刺激作用，限制了大黄酚的进一步应用。
药物微囊化后，可以掩盖药物的不良气味、提高药物的稳定性，还可进一步制成其他剂型，是药物达到缓、控释作用及提高靶向性的有效手段，在改善给药方式、降低不良反应等方面具有重大意义，有利于根据临床用药需要制成高效的剂型。
    有关大黄酚微囊(Chrysophanol microcapsule,Chry M)的研究国内外尚未见报道。大黄酚微囊可防止大黄酚氧化，提高其稳定性；有效掩盖其苦味，可提高生物利用度、为大黄酚的临床应用提供药理依据、方便临床用药等。本实验考察了大黄酚微囊的体外溶出度。

材料与方法
1 材料
1.1 药品与试剂
大黄酚标准品(Chrysophanol reference):中国生物制品检定所提供,大黄酚为金黄色柱状结晶,熔点196℃-198℃；
大黄酚(Chrysophanol): 南京泽朗医药科技有限公司提供，纯度为98%；
大黄酚微囊(Chrysophanol microcapsule,Chry M):实验室自制；
无水乙醇(Ethanol absolute):天津化学试剂公司,分析纯；
95%乙醇(95% Ethanol):天津化学试剂公司分析纯；
实验用水均为三重蒸馏水。
1.2 主要仪器设备
722N型-紫外可见分光光度计：上海洪纪仪器设备有限公司；
ME235P型电子分析天平:上海赛多利斯仪器有限公司；
雷磁pHS-3C 型酸度计：上海雷磁酸度计公司；
S648电热恒温水浴箱：上海医疗器械厂；
SZ-97A自动三重纯水蒸馏器：上海亚荣生化仪器厂；
D-800智能药物溶出仪:天津市天大天发科技有限公司；
KQ-300DE型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；
WG-136电热鼓风干燥箱:天津市泰斯特仪器有限公司。
2 方法
2.1 测定波长的选择
精密称取大黄酚标准品10mg于100ml量瓶中，加无水乙醇98ml，超声5min，再用无水乙醇定容，摇匀得标准溶液。精密量取标准溶液配制成10.0μg•ml-1的无水乙醇溶液。以无水乙醇为空白，于200nm～600nm波长范围内扫描。同时，取空白溶液，在200nm～600nm之间扫描[3]。
2.2 溶出介质的选择
0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液    称取10g胰蛋白酶，置于500ml烧杯内，加200ml水溶解。称取6.8g磷酸二氢钾，加入500ml水，37℃水浴溶解，用0.1mol•L-1氢氧化钠溶液调节pH 值至6.8。将上述两液混合并转移至1000ml量瓶中，加入5g十二烷基硫酸钠，用水稀释至刻度，即得。
0.5%十二烷基硫酸钠人工胃液[4,5]  量取稀盐酸16.4ml，加水约800ml，与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，调pH值至1.2，加入5g十二烷基硫酸钠，即得。
精密称取大黄酚标准品10mg于100ml量瓶中，选取上述人工胃液及人工肠液为溶剂，分别制成10.0μg•ml-1的人工胃液和人工肠液溶液。同时以相应介质为空白，在200nm～600nm范围内扫描。
2.3 标准曲线制备
精密称取大黄酚标准品10mg于100ml量瓶中，加无水乙醇98ml，超声5min，再用无水乙醇定容，摇匀得标准溶液。精密吸取上述标准溶液0.10，0.20，0.50，1.00，1.50ml至10ml量瓶中，分别用含0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液做溶剂，超声15min，定容。得1.0，2.0，5.0，10.0，15.0μg•ml-1的大黄酚0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液溶液。用0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液置1cm比色皿中，以含0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液为空白，在255nm波长处测定吸收度A，绘制标准曲线。
2.4 精密度试验
于第0，1，2，3，4h分别取5.0μg•ml-1的大黄酚0.5%十二烷蛩崮迫斯こσ喝芤翰舛ㄎ斩華，计算RSD值。
2.5 加样回收率试验
分别精密吸取1mL的1.0，2.0，5.0μg•ml-1供试液于三个10mL量瓶中,分别加入1mL标准溶液，以0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液为溶剂，定容。测定吸收度A，计算平均回收率。
2.6 大黄酚微囊的含量测定
    精密称取大黄酚微囊30mg于100ml量瓶中，加无水乙醇98ml，超声5min，再用无水乙醇定容，摇匀得微囊溶液。精密吸取上述微囊溶液1.00ml至10ml量瓶中，用含0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液做溶剂，超声15min，定容。测定吸收度A，代入标准曲线方程计算得微囊含量。
2.7 溶出度测定[5]
分别精密称取大黄酚5mg和相当含量的微囊各3份，以0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液900ml作溶出介质，采用桨法，转速：100r•min-1，温度：(37±0.5)℃，分别于0,10,30,60,120,180,240,300min吸取介质10ml(同时补充同温等量介质)，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液以溶出介质为空白，在255nm波长处测定吸收度A，求得溶出量，按下式计算各个时间点的平均累积溶出度，绘制溶出曲线。

平均累积溶出度（%）=        浓度×稀释倍数        ×100%
        微囊重量×药物百分含量       
2.8 统计学处理
应用SPSS11.0统计软件进行数据处理，以均值±标准差（ ±s）表示，并进行方差分析，表格图形绘制使用Word2000软件。
结    果
1 测定波长的选择
由Fig.1， Fig.2我们可看出大黄酚的测定波长应为255nm。
2 溶出介质的选择
由Fig.3-6可知，用含0.5%十二烷基硫酸钠的人工肠液作溶出介质，效果较好。
3 标准曲线方程
以含0.5%十二烷基硫酸钠人工肠液为溶出介质绘制标准曲线，所得数据见Table 1，标准曲线见Fig.7，方程为： A=0.073C+0.0313(r=0.9997)，可见大黄酚浓度在1.0～15.0μg•ml-1范围内溶出度线性关系良好。
4 精密度试验
测得数据见Table 2，计算得RSD为1.22％（n＝5），精密度良好。
5 加样回收率试验
测得数据见Table 3，计算得平均回收率为99.97％，RSD为1.55％（n＝3），准确度良好。
6 大黄酚微囊的含量
    测定稀释的微囊溶液的吸收度A为0.385，计算得微囊的含量为16.15％。
7 溶出度测定
微囊溶出度结果见Table 4，绘制的溶出曲线见Fig.8。结果表明，在溶出测定240min内，微囊的释放量逐渐增大，而大黄酚的释放量是先增大后减少，呈抛物线或倒V形，并且上述二者的释放量以微囊为大，因此，在制成微囊后，可缓慢释放大黄酚，延长其疗效，减少给药次数，从而增加药物的安全性。

附图









附表





试验后讨论
1 测定方法的确定
紫外分光光度法测定药物的含量具有操作简单、方便、迅速、灵敏度高等优点，适用于在紫外区有吸收的药物测定。
通过实验证实，大黄酚微囊在200nm～600nm有紫外最大吸收峰，分别为255nm、430nm，并且峰形良好，吸收强度以255nm为最高，并且空白溶液在200nm～600nm无吸收。故选用在255nm处测定大黄酚的吸收度，从而测定出大黄酚的含量。
2 溶出介质的选择
分别以人工胃液及人工肠液作为溶出介质对大黄酚和大黄酚微囊溶出度测定，结果表明，在人工胃液中，大黄酚和大黄酚微囊的吸收及溶出效果不佳，而在人工肠液中，大黄酚及其微囊的吸收及溶出度较好，故选用人工肠液作溶出介质。
3 表面活性剂的影响
大黄酚为蒽醌类化合物，有抗菌、抗凝、止咳、利尿、抗癌、抗衰老等作用。但其易被氧化，难溶于水，而表面活性剂具有增溶、乳化、润湿、杀菌、消泡等作用。因此我们加入表面活性剂十二烷基硫酸钠以改善大黄酚及其微囊溶出效果。