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主题：【第六届原创】SPE-HPLC测定饲料中5种磺胺类药物

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发表于：2013/11/18 11:36:35 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

前言：胺类药物(sulfonamides, SAs) 指具有对氨基苯磺酰胺结构的药物，主要包括磺胺嘧啶(sulfadi-azine)、磺胺间甲氧嘧啶(sulfadiazine)、磺胺二甲基嘧啶(sulfadimidine)、磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole)、磺胺喹恶啉(sulfaquinoxaline),在养殖业中广泛用于预防和治疗细菌感染性疾病。

动物组织、血液、蛋、奶、蜂蜜中磺胺类药物的检测方法已见诸报道, 主要有薄层色谱法、酶联免疫法、高效液相色谱法或高效液相色谱柱前或柱后衍生荧光检测法。而在饲料的报道也有，多采用国标的方法。本文建立了SPE-HPLC-UV 测定饲料中磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉5种磺胺类药物的方法, 结果令人满意。

Win-12作为手动SPE，可加压控制流速，也可以液体自然下滴，滑块的设计使收集液和废液转换更方便，使手动的SPE更人性化。

1、实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：四元低压LabTech-HPLC；色谱柱：LabTechC18 4.6 mm×25 cm；LabTech旋转蒸发仪；Win-12手动固相萃取仪。

试剂：冰乙酸，优先级；甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；所用水均为超纯水。

流动相：在1 000 mL容量瓶中加入750 mL去离子水，移取冰乙酸3 mL加入水中，与250 mL乙腈混合，摇匀，过0.45 μm滤膜，脱气，备用。

磺胺类药物标准溶液浓度20 μ/mL：磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉。

固相萃取柱：碱性氧化铝固相萃取柱，500 mg/3 mL。

1.2 样品处理

1.2.1 样品制备

饲料，打碎。

1.2.2 样品提取

称取混合饲料样品2 g，置于具塞锥形瓶中，加入 50 mL的乙腈于振荡器振荡提取 30 min，过滤，滤液备用。

1.2.3 样品SPE净化

准确吸取试液混合饲料2 mL，移入用10 mL乙腈淋洗过的碱性氧化铝小柱中，令其自然流速流出。待试液全部流出后吹干，用2次2 mL流动相洗脱，收集洗脱液，并过0.45 μm 的滤膜，滤液上HPLC测定。

1.3 HPLC色谱条件

流动相：乙腈:水(25:75）；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长为270 nm；进样量：20 μL；柱温：40℃。

2 结果与讨论

2.1 磺胺类药物的HPLC色谱图

将5种磺胺类药物混标进HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉浓度均是4mg/mL。结果如图所示：见图1。

1.磺胺嘧啶；2.磺胺间甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲恶唑；5.磺胺喹恶啉

图1 5种磺胺类药物的HPLC色谱图

2.2重复性实验

将5种磺胺类药物混标进HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉浓度均是2mg/mL，重复进样，重叠色谱图如下图所示，并且计算出峰时间重复性RSD均小于5%，见表1。

1.磺胺嘧啶；2.磺胺间甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲恶唑；5.磺胺喹恶啉

图2 5种标品的重叠色谱图

表1 5种标品的重复性及RSD%

标品	1	2	3	4	5	RSD（%）
磺胺嘧啶	4.558	4.557	4.540	4.553	4.553	0.158
磺胺间甲氧嘧啶	6.377	6.373	6.360	6.377	6.377	0.116
磺胺二甲基嘧啶	7.597	7.590	7.573	7.587	7.582	0.118
磺胺甲恶唑	10.453	10.440	10.408	10.433	10.420	0.167
磺胺喹恶啉	16.950	16.935	16.895	16.917	16.893	0.147

2.3 饲料样品的空白色谱图和加标色谱图

饲料空白样品和加标样品经过提取，并通过小柱净化后，得到的色谱图见图3和图4.。

图3饲料样品空白的色谱图

1.磺胺嘧啶；2.磺胺间甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲恶唑；5.磺胺喹恶啉

图4饲料样品加标的色谱图（1 mg/kg）

2.2 饲料样品过SPE净化的回收率及RSD

采用加标样品（加标浓度磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶;磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉均为1 mg/mL），经提取、SPE净化处理，并用 HPLC分析，计算加标回收率及相对标准偏差，5 种磺胺类药物的回收率均在 82.65%~105.70%之间，RSD 均小于10%（表2）。

表2饲料样品中加标过SPE5 种磺胺类药物的回收率及RSD(n = 5)

峰序	保留时间（min）	SPE-1	SPE-2	SPE-3	SPE-4	SPE-5	平均值	RSD%
磺胺嘧啶	4.558	102.04	94.62	91.92	85.79	94.77	93.83	6.24
磺胺间甲氧嘧啶	6.377	108.14	99.90	98.39	91.99	100.78	99.84	5.79
磺胺二甲基嘧啶	7.597	108.46	102.18	106.25	107.78	103.85	105.70	2.51
磺胺甲恶唑	10.453	94.46	83.06	86.91	76.719	78.97	84.02	8.35
磺胺喹恶啉	16.950	93.22	85.57	80.65	76.54	77.28	82.65	8.35

3、结论

本方法对饲料样品提取，并采用手动的Win-12SPE净化，采用HPLC检测其中的5种磺胺类药物，5种磺胺类药物的回收率均在82.65%~105.70%之间，RSD均小于10%。实验过程操作简单，结果显示数据理想，可用于常规的饲料中磺胺类药物的检测。

参考文献

〔1〕GB/T19542-2007. 饲料中磺胺类药物的测定高效液相法.

〔2〕李兰, 索德成, 王培龙等.固相萃取 - 高效液相色谱法测定饲料中5 种磺胺类药物的研究,动物生产, 2008,44( 5) : 58- 60.

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2013/11/18 12:35:52 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主，这是你写的原创吗？

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2013/11/18 12:36:09 Last edit by zsj201204