主题：【原创】DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的测定解决方案

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发表于：2014/01/27 10:20:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

目前检测黄曲霉毒素主要有薄层色谱法 ( TLC )、免疫亲和柱-高效液相色谱法( HPLC- FL)、酶联免疫法( ELISA)、免疫亲和柱-高效液相色谱法串联质谱法等，薄层色谱法和酶联免疫法主要应用黄曲霉毒素的定性，不能准确定量，免疫亲和柱-液相色谱法和液相色谱法-串联质谱能够准确定量，但是由于免疫亲和柱与质谱检测成本高，应用范围受到限制。

方法优势：

对比国标方法《GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》，迪马科技开发的《DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的测定》采用检测成本较低的固相萃取-液相色谱法，也可达到准确定性定量，并且本方案具有：

前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好等特点；
避免了免疫亲和柱容易受环境影响而引起黄曲霉毒素B1回收率低和净化效果不好的弊端，保证了实验结果的重现性和准确性；
过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，检测成本相对较低，能被很多企事业单位采用；
检出限是0.1 μg /kg，远低于国家标准和欧盟标准
(欧盟对植物油中黄曲霉毒素B1限量标准不得高于 2 μg /kg，我国标准《GB 2761-2011 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》对其限量要求不得高于10 μg /kg)

以下为详细解决方案，敬请参考！

1、适用范围

本方案适用于DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B₁的检测，方法检出限是0.1 μg /kg。

2、提取

(1) 取0.5 g样品于15 mL离心管中，加入2 mL正己烷混匀，加入10 mL乙腈，涡旋混合2 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；

(2) 向步骤(1)下层残渣中加入10mL乙腈，按照步骤(1)重复提取一次，收集上清液。

(3) 合并步骤(1)、(2)的上清液，在40 ℃下减压蒸至低于5 mL，待净化。

3、净化——ProElut AFT-2 12 mL（Cat.#65906）

a活化：	向柱中加入10 mL乙腈，流出液弃去；
b上样：	加入待净化液，收集流出液；
c洗脱：	加入20 mL 乙腈，收集流出液，合并步骤(b)、(c)流出液；
d衍生：	将流出液在40 ℃下减压蒸至完全干燥，依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸，旋紧玻璃塞充分混匀衍生液，45 ℃静置10 min，吹干衍生液，用流动相定容至1 mL。

4、色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2), 250 mm × 4.6 mm, 5 μm（Cat# 99603）
流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：30 ℃
检测器：荧光检测器，Ex：365 nm；Em：435 nm
流动相：A：水；B：异丙醇+乙腈=3+2；A/B=8/2

5、添加回收结果
DHA冬化油中黄曲霉毒素B₁的HPLC检测添加回收结果

植物油中黄曲霉毒素B₁的HPLC检测添加回收结果

油脂中黄曲霉毒素B1检测专用固相萃取柱

货号：65906
描述：ProElut AFT-2 12 mL 20/pkg
产品特点：ProElut AFT-2专用柱填料由多种吸附剂按照一定的比例分层填装而成，采用多种作用机理去除油脂以及其他杂质，适用于油脂类样品中黄曲霉毒素B1的检测；本产品避免了免疫亲和柱容易受环境影响而引起黄曲霉毒素B1回收率低和净化效果不好的弊端，保证了实验结果的重现性和准确性；本产品过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，成本相对较低，能被很多企事业单位采用。

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