紫外可见分光光度计(UV)

主题:[资料]差示分光光度法

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znconi
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差示分光光度法(Difference Spectrophotometry):简称ΔA法。取两份相等的供试液,一份加酸,另一份加碱或缓冲液或其他能够发生某种化学反应的试剂,有时也可不加任何溶液,然后将两者分别稀释至同样浓度,一份置样品池中,另一份置参比池中,于适当波长处,测其吸收度的差值(ΔA值),在供试溶液的一定浓度范围内,ΔA值与浓度C之间呈线性关系。优点:在不同pH介质中,或经适当化学反应后,供试物发生了特征性的光谱变化,而赋形剂或其他共存物质不受pH条件或化学试剂的影响,未引起光谱变化,从而消除了它们的干扰。同时,参比池与样品池中含有相同浓度的供试物与干扰物,这就为吸收度的测量提供了一个近似理想的参比溶液。

ΔA法主要有:
1、利用最大吸收波长进行药物的测定:紫外光谱对pH十分敏感时,可测得ΔA(碱-酸)或ΔA(pH7-酸)。
2、利用最大吸收与最小吸收之差(即振幅)进行药物测定:某些药物共存物在某pH范围内的光谱与pH无关(即吸收度不变)。而主药有最大和最小吸收,两者差值与主药浓度成正比。
3、利用干扰杂质等吸收波长进行测定:于干扰物的等吸收波长处进行测量,如测得供试物的相应吸收度,即可消除共存物的干扰。
4、利用最小吸收波长(lmin)处的增色效应进行测定:某些药物在碱性和酸性溶液中于处吸收重叠,但吸收值不同。但在碱性或酸性溶液中于lmax或lmin处可产生增色效应,利用此效应可测定药物浓度。
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