原文由 长江七号(nedved33) 发表:原文由 sukiliang(sukiliang) 发表:
定容标样的应该用初始流动相来定容的!
我做过17种的峰型很好看啊!
这位老师,能告诉我一下您用的是什么色谱柱和流动相条件吗?
我现在做的22种喹诺酮类药物不只常见的沙星类,还有吡哌酸、氟甲喹、萘啶酸、那氟沙星之类,尤其是后3者,峰拖得很厉害
定容溶剂已经换成乙腈+水=1+9了,流动相换成A:0.2%甲酸水和B:乙腈+甲醇=6+4了,柱子还是BEH C18,分离和响应还是不理想。
原文由 长江七号(nedved33) 发表:
现在在建20种喹诺酮类药物的UPLC-MS/MS方法,质谱参数都已经通过注射泵进样摸好,但液相条件一直搞不定。
用的BEH C18柱,流动相是甲醇和0.1%甲酸水,大部分化合物峰形很难看,后出峰的峰还展宽,有1min。
My GOD,这可是UPLC啊,做出这么宽的峰真是对不起发明UPLC的前辈。
另外混标工作液是用纯甲醇稀释的,定容溶剂是否也对峰形有影响。
论坛里的老师有做过喹诺酮类药物的,能不能分享一下使用的色谱柱和流动相及梯度条件,万分感谢啊!
表1 梯度洗脱条件
时间/min | 乙腈/% | 0.1%甲酸水溶液/% |
0.00 | 13 | 87 |
2.00 | 13 | 87 |
5.00 | 90 | 10 |
10.00 | 90 | 10 |
10.01 | 13 | 87 |
16.00 | Stop |
表2 质谱仪离子源参数
Source/Gas | |
Collision Gas(CAD) | 6 |
Curtain Gas(CUR) | 30 |
Ion Source Gas 1(GS 1) | 30 |
Ion Source Gas 2(GS 2) | 30 |
Ion Spray Voltage(IS) | 5500 |
Temperature(TEM) | 500 |
Interface Heater(ihe) | On |
原文由 ctary(v2807696) 发表:原文由 长江七号(nedved33) 发表:
现在在建20种喹诺酮类药物的UPLC-MS/MS方法,质谱参数都已经通过注射泵进样摸好,但液相条件一直搞不定。
用的BEH C18柱,流动相是甲醇和0.1%甲酸水,大部分化合物峰形很难看,后出峰的峰还展宽,有1min。
My GOD,这可是UPLC啊,做出这么宽的峰真是对不起发明UPLC的前辈。
另外混标工作液是用纯甲醇稀释的,定容溶剂是否也对峰形有影响。
论坛里的老师有做过喹诺酮类药物的,能不能分享一下使用的色谱柱和流动相及梯度条件,万分感谢啊!
附件方法供你参考!用LC-MS检测,前处理用IPRE HLB小柱,色谱条件如下:
1)色谱柱:Venusil ASB C18(2.1×150mm,5μm,100Å);
2)质谱仪:API 4000;
3)流动相:A:0.1%甲酸的水溶液;B:乙腈溶液;表1 梯度洗脱条件
时间/min
乙腈/%
0.1%甲酸水溶液/%
0.00
13
87
2.00
13
87
5.00
90
10
10.00
90
10
10.01
13
87
16.00
Stop
4)流速:0.3mL/min;
5)柱温:40℃;
6)进样体积:2uL;
7)离子源:电喷雾(ESI),正离子模式;
8)检测方式:多反应监测(MRM)。表2 质谱仪离子源参数
Source/Gas
Collision Gas(CAD)
6
Curtain Gas(CUR)
30
Ion Source Gas 1(GS 1)
30
Ion Source Gas 2(GS 2)
30
Ion Spray Voltage(IS)
5500
Temperature(TEM)
500
Interface Heater(ihe)
On