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主题：【求助】分离的难题

浏览0 回复10 电梯直达
gjhgem
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发表于：2014/05/20 14:25:05 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一组化合物，用75%的乙腈淋洗时，第3、4峰分得很好，12、13峰分不开。用60%乙腈时，3、4峰分不开，12、13峰分得很好。用梯度淋洗，先75%几分钟后再60%，结果跟用75%等度的结果一样。请教如何设置一个梯度来使两组峰都分开？

75%乙腈：



60%乙腈



梯度

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2014/5/20 23:20:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用甲醇乙腈水试试。
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zhaohua8011
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2014/5/21 10:43:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换根不同长度色谱柱！
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bingwang228
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2014/5/21 10:52:45 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是梯度改变的时间太晚了，毕竟溶剂转换色谱柱也有个适应的过程，相当于活化的过程，可以早一点改变梯度浓度，还有上面有童鞋讲的，可以降低流动相的极性
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浪淘沙隐
zhoujin83
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2014/5/21 11:33:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不明白楼主为何要先用高比例有机相到低比例有机相梯度，这样不是正常的条件，所以可以看到你用这个条件后面的峰都是矮胖峰，并且还能发现有两个物质在75%乙腈等度方法中没有分开。
如果是我需要优化方法，我会尝试60%乙腈，20分钟后升到80%。但是这样估计不能解决问题。所以，可以尝试下一楼三人行老师说的，在流动相中加入一定量的甲醇试试，也许能增加些选择性。
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gjhgem
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2014/5/21 14:04:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢回复，有些问题还想请教一下
1、先75%再60%的梯度是想先用75%分开3、4号峰，再用60%分开12、13号峰，但实际却不行，只能先低后高吗？
2、甲醇乙腈水的话，大概是怎样的比例？
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hujiangtao
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2014/5/21 14:13:50 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这种情况换梯度估计也够呛，换柱子试试
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浪淘沙隐
zhoujin83
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2014/5/21 14:33:58 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 gjhgem(gjhgem) 发表:
谢谢回复，有些问题还想请教一下
1、先75%再60%的梯度是想先用75%分开3、4号峰，再用60%分开12、13号峰，但实际却不行，只能先低后高吗？
2、甲醇乙腈水的话，大概是怎样的比例？


看样子楼主还不太明白反相HPLC的分离原理，可以多了解下。在反相HPLC中，物质的保留是和有机相比例呈反比的，有机相越多，保留越弱，反之越强。所以如果你一开始就尝试大比例的有机相，那么一些物质的保留就减弱，分离度也就随之降低。所以RP-HPLC都是从小比例有机相过度到大比例有机相的。

对于RP-HPLC来说，不同的有机溶剂，其洗脱能力是不一样的，对于一些化合物的选择性也不一样（具体表现为保留时间、分离度），所以，当你的方法中有2个峰分离度不好时，可以尝试使用其他溶剂，比如甲醇或四氢呋喃，说不定会有惊喜。但是更换溶剂时，需注意方法中化合物的稳定性，有些物质在甲醇中可能不稳定。

但是，这些都是很麻烦的事情，楼主你一直没说明用的是什么色谱柱。如果你使用的是15cm的柱子，那么换个25cm的柱子是个不错的选择，很有可能立刻就解决问题了。
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2014/5/21 14:35:56 Last edit by zhoujin83
gjhgem
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2014/5/21 14:47:12 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢，柱子是ODS的250mmX4.6mmX5um
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袖剑
v2869754
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2014/5/21 15:09:40 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道，这些峰都是什么成分，考虑换固定相吧
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e_liang369
v2821515
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2014/5/22 8:57:15 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换成梯度洗脱看看
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