主题：【原创】[六月份原创]肉及肉制品中瘦肉精（沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗）的测定

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nphfm2009

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发表于：2014/06/01 07:01:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

检测依据：SN/T1924-2011；仪器：安捷伦液质联用仪1290/6460

提取步骤

称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50µLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37度环境下酶解12h。添加100µL的10ng/mL内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器上振荡15min，离心10min(5000r/min )，取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清夜转移到50ml的离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置，然后将上述残渣溶液上柱，依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5)，超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤，上LC-MS/MS进行分析。
SPE净化步骤净化
SPE柱：Welchrom® P-SCX，60mg/3mL;货号WSP020306
a 活化：依次加入5mL 甲醇和5mL水，流出液弃去；
b 上样：将提取液加入Welchrom® P-SCX柱中，流出液弃去；
c 淋洗：依次用5mL水，5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；
d 洗脱：6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；
e 重新溶解：50ºC下氮气吹干洗脱液，准确定容至1mL后用LC-MS/MS进行分析。

色谱条件

月旭Ultimate® XB-C18色谱柱：1.8µm，100mm×2.1mm；（p/N： 00201-31043，S/N：211303972）

流动相：0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈溶液，65 ：35等度洗脱
流速： 0.25ml/min
进样量：1.0μL
柱温：30ºC

质谱条件
离子源：ESI+
离子喷雾电压：3.0kV
脱溶剂气：氮气，流速500L/h 温度400℃
碰撞气：Ar 0.27ml/min
分辨率：Q1（单位）Q3（单位）
扫描模式：MRM

扫描模式：MRM

项目	保留时间	定性离子对（m/z）	定量离子对（m/z）
沙丁醇胺	1.444	240.0＞148.1；240.0＞222.2	240.0＞148.1；
莱克多巴胺	1.665	302.2＞164.1；302.2＞284.1	302.2＞164.1；
克伦特罗	1.751min	277.3＞203.1；277.3＞259.3	277.3＞203.1

工作曲线：

沙丁醇胺

莱克多巴胺：

克伦特罗：

工作曲线的相关数据：

沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗分离色谱图：

浓度为5ng/mL

浓度为150ng/mL：

沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗的质谱信息：

样品色谱图及质谱信息：

故样品的沙丁醇胺含量为：0.3053/5=0.061ug/kg,小于方法的检出限0.5ug/kg

莱克多巴胺：0.2798/5=0.06ug/kg,小于方法的检出限0.5ug/kg

克伦特罗：0.3034/5=0.06，大于方法的检出限0.05ug/kg，但从样品的质谱信息可看出，该化合物不是克伦特罗的质谱信息。

故样品中沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗均为未检出。

加标回收率试验（加入30ng/g沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗三种混标到样品中与样品同时进行前处理）：

色谱图及质谱图信息：

故样品的加标回收率试验结果见表2

表2：加标回收率测定结果

样品名称	原始含量(ng/g)	加标含量(ng/g)	检测量(ng/g)	回收率(%)
沙丁醇胺	--	30	30.5474	101.8
莱克多巴胺	--	30	30.0273	100.0
克伦特罗	--	30	28.5609	95.2