主题：【分享】《CNW液相色谱柱使用征文大赛之十三》：CNW Athena HILIC(4)测定食品中三聚氰胺和三聚氰酸的含量

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发表于：2014/07/30 11:21:03 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

CNW Athena HILIC(4)测定食品中三聚氰胺和三聚氰酸的含量

1.实验目的：实验背景及目的

1.1实验背景

三聚氰酸是三聚氰胺的衍生物，三聚氰胺在强酸或强碱溶液中水解最终生成三聚氰酸，因此三聚氰酸是生产三聚氰胺过程中必然会产生的副产物，而三聚氰胺遇上三聚氰酸，就会形成无法溶解的氰尿酸三聚氰胺复合物，若在人体内就会形成结石损伤肾脏。FDA 2008年11月设定标准：如果奶粉中不同时含有三聚氰胺及其衍生物三聚氰酸、且任一者含量不超过1mg/L，则为“安全产品”；国家卫生部于2008年10发布《中国乳制品三聚氰胺临时管理限量值规定公告》规定：婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限值为1mg/kg；2液态奶（包括原料乳）、乳粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg；含乳15%以上的其他食品三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg

1.2实验目的

检测食品中三聚氰胺及其衍生物三聚氰酸的量，控制食品中三聚氰胺及其衍生物三聚氰酸的量。
2实验方法

2.1样品前处理方法：

2.1.1称样流程：称取均质试样2g置于50mL塑料离心管中，加入2mL去离子水，200uL的三聚氰胺同位素内标溶液和400uL的三聚氰酸同位素内标溶液，加入4mL乙腈，涡旋混合30s，再加入一定量1mol/L盐酸溶液调节pH至2.0~3.0，涡旋混合2min，超声15min，4℃下8000r/min，离心5min，上清液过滤纸于15mL玻璃试管中，用乙腈/水溶液（1:1）稀释至8mL左右，待净化。

21.2净化流程：依次用3mL甲醇、3mL乙腈水溶液过MCT固相萃取柱使之活化，将待净化的样品液转入MCT柱中，控制流速不超过1滴/s，用2mL乙腈水溶液洗涤柱体，在低真空条件下抽干小柱，依次用2mL甲醇、4mL5%氨水甲醇溶液洗脱柱体，收集洗脱液。40℃条件下氮吹至干，加入1.0mL流动相振荡溶解残渣，过0.22umPTFE膜后上LC-MSMS测定

2.2标准品配制过程：

2.2.1一级储备液：精确称取三聚氰胺标准品0.1g，用乙腈/水溶液(1:1)溶解后定容至100mL，得1mg/mL的三聚氰胺标准储备液。精确称取三聚氰酸标准品0.1g，用少量二乙胺溶解后，甲醇定容至100mL，得1mg/mL的三聚氰酸标准储备液。

2.2.2 二级储备液：准确移取100uL三聚氰胺与三聚氰酸标准储备液至100mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，得浓度为1ug/mL的三聚氰胺与三聚氰酸的混合标准溶液。

2.2.3校正曲线范围：

用流动相将混合标准溶液配制成10、20、50、100和200ng/mL的标准溶液，上机测试。

2.3色谱条件：

3.结果分析

3.1色谱图：使用HILIC柱能获得较好的响应值和峰型。

三聚氰酸

三聚氰胺

3.2曲线线性

3.2.1三聚氰胺的线性

3.2.2 三聚氰酸的线性

三聚氰胺与三聚氰酸线性均能达到0.995以上。

3.3 回收率

4.讨论

4.1测试用C18色谱柱，均没有保留，而普通的HPLC方法，需用到离子对试剂，不适用于LC-MSMS；

4.2 使用MERC-ZIC HILIC色谱柱进行检测，得到的结果峰面积偏差较大，分析原因可能是其具有阳离子交换基团，对目标物有不稳定的死吸附；

4.3 使用CNW Athena HILIC(4)，通过亲水作用色谱机理能进行三聚氰胺与三聚氰酸的分离检测。同时可通过调节流动相配比与梯度，可得较高响应和峰型较好的目标物。

4.4 但CNW Athena HILIC(4)的适用范围较小，曾试用CNW Athena HILIC(4)柱子开发草甘膦与百草枯，均不能得到满意的图谱；

4.5 同时CNW Athena HILIC(4)柱子性质不稳定。在使用两个月（总进样次数不超过300次）发现其对三聚氰酸的保留能力降低，不能很好的保留三聚氰酸，而三聚氰胺则完全没有这个问题。且说明书中柱子性能、保存条件等信息不详，不能是顾客更好地使用与维护，建议增加这方面的资料等；

4.6用MCT柱仍然不能将奶粉中干扰物与目标物分离，加标回收率较低。