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主题：【求助】目标峰分离不开

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m2945792
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发表于：2014/10/11 21:07:54 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品是水提的，测的是天麻素含量，前段时间样品中天麻素可以分离出来，可是现在分离不出来了，旁边老是有一个峰和它黏在一起。条件和原来的一样的，为什么就结果会变呢？之前的条件是：流动相为0.1%磷酸-乙腈（5：95），出峰时间为7分钟左右，分离还可以。今天分离不开，我又换了条件，磷酸改为0.05%的，比例改为3：97（药典规定的）也分离不开。请问还可以怎么解决？请各位帮帮忙谢谢啦！
该帖子作者被版主 夏天的雪加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖
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2014/10/11 21:41:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
冲洗色谱柱或者换根色谱柱试试
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浪淘沙隐
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2014/10/11 22:14:28 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要想将两个峰分开，就需要减少有机相比例，而楼主你却增加了比例，这是南辕北辙啊。
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m2945792
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2014/10/12 0:38:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
“原文由夏天的雪发表:冲洗色谱柱或者换根色谱柱试试”
谢谢您的回复呀亲，每次我们做完实验都会冲洗柱子2个小时左右呢，柱子也算是挺好的
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m2945792
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2014/10/12 0:42:36 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
“原文由浪淘沙隐发表:要想将两个峰分开，就需要减少有机相比例，而楼主你却增加了比例，这是南辕北辙啊。”
谢谢亲的回复呢。比例是降到3：97过了的可是结果还是分不开，是不是仪器问题呢？我们用含测的仪器是waters的而且没柱温箱，谢谢回复
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wslmpol
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2014/10/12 22:20:11 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
额，楼主你么有看清楚2楼的回复。。。另外，磷酸盐浓度貌似对保留时间没有影响吧
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m2945792
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2014/10/13 1:25:40 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
“原文由wslmpol发表:额，楼主你么有看清楚2楼的回复。。。另外，磷酸盐浓度貌似对保留时间没有影响吧”
嘿嘿不好意思哈流动相反了，是乙腈-磷酸3：97
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浪淘沙隐
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2014/10/13 15:32:33 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道楼主用的什么牌子的HPLC，7min的保留时间很短的，这样短的RT有峰不能分开很正常的。实在不行换跟水性柱，不要有机相，试试看。或者换其他的色谱柱试试。
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fiyingwing
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2014/10/13 21:56:07 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
每个样品前面先走个空白试试看？
减少进样量试试看，比如从20μL改成10μL。
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zhaohua8011
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2014/10/16 8:22:18 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相是否有变化，温度变化或者色谱柱没有平衡！
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hujiangtao
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2014/10/16 8:30:07 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有机相和比例降低试试
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