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主题：【第七届原创】【许愿原创】高效液相色谱法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

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夏天的雪
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发表于：2014/11/30 23:42:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为bingwang228原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
    脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），又名呕吐毒素，是镰刀菌属（Fusarium）的禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、头孢菌属、漆班菌属、木霉属等菌株的代谢产物，广泛存在于小麦、大麦和玉米等谷物及谷物加工产品中，是污染食物的主要真菌性毒素。

    目前，食品、农产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇等真菌毒素的检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、免疫亲和柱-荧光光度法、高效液相色谱法和质谱法。本文建立了一种甲醇提取小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇，并通过高效液相色谱法测定其含量的方法，该方法具有简单、快速、准确等优点，可用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的快速测定。

1 材料与方法

1.1 仪器

Waters e2695液相色谱仪（主要包括2998光电二极管矩阵检测器，柱温箱，自动进样器）；均质器；微型漩涡混合仪；台式低速自动平衡离心机；固相萃取仪；循环水式真空泵。

1.2 试剂

甲醇，色谱纯；

聚乙二醇，相对分子质量8000；

水为超纯水系统制得；

DON免疫亲和柱；

DON标准溶液，浓度为100μg/mL。

1.3 仪器分析条件

色谱柱：Odyssil C18(250mm×4.6mm, 5μm)；

Cat：OS952505-0

S/N:O9510525BXP0042

流动相：甲醇：水=25：75；流速：1.0 mL/min；进样体积：20μL；柱温：30℃；检测波长：218nm。

1.4 样品前处理

准确称取5.0g小麦粉样品于50mL离心试管中，加入25mL甲醇溶液，用玻璃棒将样品搅拌均匀。混匀后的样品经漩涡仪继续漩涡2min，再以4000r/min离心10min，吸取少量上层清液，用0.45μm滤膜过滤后进样分析。
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夏天的雪
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2014/11/30 23:43:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2 结果与讨论

2.1标准溶液的测定及线性关系

    准确吸取1.0mL DON标准溶液，用甲醇稀释成浓度为10.0μg /mL的标准储备溶液。临用前，再吸取一定体积的上述标准储备液，配成浓度分别为0.10μg /mL、0.20μg /mL、0.40μg /mL、 0.60μg /mL、 0.80μg /mL和 1.0μg /mL的标准工作液。按照上述色谱条件对标准工作液进行测定，以样品峰面积Y(mV)对质量浓度X（μg/mL）作图，得到DON的线性回归方程为Y=130842X-2429，相关系数R2为0.9991。 






2.2 方法精密度实验

    对标准溶液和加标样品进行重复测定，考察方法的精密度和重复性，结果表明，该实验方法具有较好的精密度和重复性，标准溶液测定时保留时间、峰面积和峰高的RSD值分别为0.2、0.5和0.3；加标样品测定时保留时间、峰面积和峰高的RSD值分别为0.05、0.7和0.4，其中n=7。






2.3 与标准方法比较

    往两份相同质量的同一空白小麦粉中加入一定体积上述标准储备液，分别按照本实验方法和GB/T 23503-2009方法（结合免疫亲和柱的使用说明书）进行样品前处理，并按照上述色谱条件进行测定。从色谱图中可以看出，采用甲醇浸提处理样品后测定的色谱图中杂质的响应值较大，而经过免疫亲和柱净化后，能去除大部分的杂质干扰，样品中的杂质在色谱图中响应值较小。虽然采用本实验处理的样品与采用免疫亲和柱处理后的样品相比杂质响应较大，然而并不影响麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定，杂质出峰时间相对于待测物质而言出峰较早，而且待测物质附近并无干扰物质的出现。通过考察两种方法的回收率，实际结果表明，采用甲醇直接浸提提取小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法具有更好的回收率。





注：免疫亲和柱净化样品方法如下

    准确称取5.0g小麦粉样品于均质器中，加入2g聚乙二醇和25mL水，高速均质1min，用定量滤纸过滤后以玻璃纤维滤纸过滤至溶液澄清，收集滤液备用。

    将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取1.0mL上述滤液注入玻璃注射器中，调节压力，使溶液以约1滴/秒的速度通过免疫亲和柱。用5mL水淋洗免疫亲和柱，弃去淋洗液，并使空气通过柱体，以吹干免疫亲和柱中的液体。准确加入1.0mL甲醇，以1mL/min~2mL/min的流速进行洗脱，收集全部洗脱液，用0.45μm滤膜过滤后进样分析。

3 小结

（1）采用甲醇浸提法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇具有简单、快速、准确等优点，这与样品本身的性质也有关系。在实际检测过程中发现，小麦粉基质较为简单，样品在脱氧雪腐镰刀菌烯醇出峰附件未出现干扰物质，从而使样品前处理过程进行简化提供了可能；

（2）采用免疫亲和柱净化法进行样品前处理，方法较为繁琐，成本较高，同时样品测定还受到免疫亲和柱容量的约束。采用免疫亲和柱进化样品时，容易出现操作或者免疫亲和柱保存不当造成回收率偏低的情况。

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2014/11/30 23:57:22 Last edit by bingwang228
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2014/12/1 7:30:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
疑似谷物很容易受到污染。
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2014/12/1 8:48:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高
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2014/12/1 8:53:18 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


多大含量会导致危害呢？
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


多大含量会导致危害呢？
2760里有限量

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2014/12/1 10:57:07 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


多大含量会导致危害呢？
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


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疑似谷物很容易受到污染。
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感觉那东东对人的危害还是挺大的。
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


多大含量会导致危害呢？
2760里有限量



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感觉那东东对人的危害还是挺大的。
是的，又名呕吐毒素，看着名字就具有威慑力，
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疑似谷物很容易受到污染。
是的，检出率相对比较高


多大含量会导致危害呢？
2760里有限量



百万分之一？
高还是低？


感觉那东东对人的危害还是挺大的。
是的，又名呕吐毒素，看着名字就具有威慑力，
吃了会让人呕吐的吧
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