做液相分析的版友们,相信对离子对试剂都不陌生。离子对试剂最大的优点就是:当样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留,这时要加入相应的离子对试剂,将分析物上的离子进行结合,形成在柱子上有保留的分子;另外,还有就是改善峰形以及使分析结果的重现性更好…………可是,凡事都有两面,离子对试剂最大滴缺点就是
:对色谱柱造成不可逆的伤害,离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附,进而影响固定相活性位点。而且离子对试剂很难从色谱柱上冲洗干净,会大大缩短色谱柱的使用寿命。另外,离子对试剂
对pH值比较敏感,配制流动相时要求精确度较高。否则直接影响实验的重复性和重现性当然鉴于离子对试剂的一些优点,还是大有人在使用离子对试剂达到较好的分离效果,只要不考虑米米。下面讲讲离子对试剂的选择:
怎样选择离子对试剂在选择离子对试剂时,烷基链的长度是必须考虑的因素,因为碳链的长度决定了对样品的分离。碳链越长,对离子的疏水性越强,
如表1 和图1 中所示,Q12 的保留时间是Q5 的20 倍。
表1 和图1 同时也表明,Q 系列试剂的链长明显影响了苯甲酸的保留时间,而对苯甲醇的保留时间没有影响。S 系列试剂也具有同样的保留特性。
表1. 碳链长度对保留值的影响
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表2. pH 值对保留值的影响
苯甲酸/ 苯甲醇的保留比,流动相:水/ 甲醇(60/40)
下面是选择离子对试剂的步骤• 选择一支柱子,通常是端基封尾的C18 柱(Diamonsil、Spursil、Inspire等色谱柱均可)
• 使用色谱纯的水和试剂
• 选择获得最佳分离效果的流动相的配比
• 如果样品中含有非离子组分,在进样前需最优化样品溶液
• 选择合适的对离子,酸性化合物选用Q 系列试剂,碱性化合物选用S 系列试剂
• 选择合适的碳链长度,使分离度达到最大
• 一旦选定离子对试剂,可以通过调整pH 值来获得最佳分离。由于pH 值能够显著影响保留时间,所以在调整时,应该微调,不可调整幅度太大。离子对试剂在流动相中的理想浓度通常是0.005 M,但是也可以通过调整其浓度的大小来优化分离效果