主题：【分享】流动相使用中的十禁(上）

标题很劲爆...可是，其实，我是个正经人，内容其实没那么不健康，可能就是有点毁以往在做实验中积累下来的三观...
言归正传，其实下面要说的十件事儿还真没标题说的严重，很多时候，我们压根认为它们就是天空飘来的五个字儿：那都不是事儿，可能，在很多，时候，他们也确实算不上实验里的正事儿，不过，在有些时候，他们真的会对实验的结果有些不良的影响，所以，应该尽量避免（说绝对禁止其实有点夸张，因为大部分情况下，他们真的就是那五个字...），如果看完这个劲爆的小段子之后，各位看官能在配置流动相前纠结的思前想后一阵子，那我邪恶的目的也就达到了...
下面真的要开始说正事儿了...

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第一禁：超声脱气

其实，应该把话说完：禁止只使用超声脱气...
超声很好用，尤其在配制含缓冲盐流动相的时候，只要超声功率强，分分钟溶掉缓冲盐，嗯，它在这方面的能力确实很强...
不过，其实，它是有些难言之隐的，比如，流动相脱气方面的能力...为什么呢，其实我们可以简单的把超声的原理理解成一种非常高频率的晃动，或者叫抖动...无论如何，这是一种简单粗暴的方式，指望通过摇晃的方法来把溶解的气体除掉，如果你用可乐做流动相可能还能看到些效果...真正顽强的气体是不怕超声的，气体潜伏在流动相的每个角落里，悄无声息，他们和流动相结合在一起，要把他们找出来，不是靠摇一摇这种敲山振虎的方法就行的...
所以，这个时候要采取一些特殊手段——真空脱气，大家估计要笑我，这个都知道...因为估计大家的仪器上都带一个在线真空脱气机的；我想说的是，千万别为了省电或者其他什么原因不用它...或者，如果它坏了，从仪器公司找个工程师给它扔个复活术吧，虽然它只是个辅助职业，但是还是液相团队里很重要的的一个角色...
好吧，我觉得还是有必要说下流动相中溶解的气体的坏处：第一，气体混在流动相混合的时候产生气泡，导致输液精准度下降；另外，如果使用到荧光检测器，流动相中的氧气很可能让某些化合物的荧光响应消失...所以，辅助职业还是一定要有的...

上面是四种脱气方法的能力：超声最渣...；真空脱气好很多；氦气脱气更好，不过这东西贵的吓人...；另外，在宇宙中，还有个更强大的存在，叫做回流...不过，大家真相费这么大的尽去处理流动相么？所以，算下来，性价比最高的就是真空脱气的方法了，而且对于流动相里讲，它的效果也已经足够好了。

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第二禁：让泵混合极端比例的流动相

关于极端比例，他们身材的差异应该就像上面图里的两位毛爷爷...大家明白了吧...
虽然现在的液相泵功能都很强大，尤其在混合效果和脱气性能上都有了很大的提升，但是他们仍然很难强大到混合极端比例的流动相，主要有两个问题：
第一，混不准，第二，混不匀，总结起来，就三个字：混不好...
为什么？这主要是由于色谱泵的工作原理决定的，混不准的问题通常又叫混合准度，这个问题通常还好，基本会变成系统误差，如果仪器方法到死不变，基本也不会有特别要命的影响；但是，混不匀的问题就大了，这个一般体现为混合精度，这是个随机误差，直接的影响就是保留时间的重现性出问题…
那么，对泵来讲，什么比例叫做极端呢？通常某一相占到5%以下的比例的时候，泵就不太应付的过来了，如果是在很低流速下使用的话，这个比例恐怕还要再高点…通常来说，二元泵在混合的精度上会比四元泵强些，四元泵在混合的准度比二元泵强些，不过，还是那句话，低于5%以后，其实大家就都彼此彼此了…所以，5%～95%的混合范围也是现在市面上绝大部分液相色谱的指标混合范围，当然你不是说你不用这个泵来做1：99的比例，只是仪器会说，如果你做这个比例，出了事儿别赖我…当然，现在市面上有个彪悍的四元泵，能做到1～99%的混合，恩，是A家的…
那么，如果要做到这种极端比例的时候，到底该怎么办？
如果是等度方法，手工预混吧，妥妥的…
如果是做个梯度方法，尤其是那种0～100%的大跨度梯度，或者是个连续变化的线性梯度（比如5～30%这样的）就忘掉上面的废话吧，在两头的极端比例下，通常不会对梯度的整体有太大影响。
但是你总有可能碰到一个梯度方法要从5---------------（这代表特别长时间的等度）5～30%，虽然有够奇葩，但它还真是存在，不要问我来源，如果你做过，你懂的…这个时候，我们得采取预混加机混的混合的方法，手工预混一路5%的流动相，走方法的等度部分就100%的走这个预混好的流动相，之后梯度变化的时候只要适当的折算一下比例保证最终两项比例同机混方法相同即可。

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第三禁：用光流动相的福根

勤俭节约一直是中华民族的传统美德，尤其在吃饭喝酒的时候，光盘行动更是处处提倡的，不过，喝光福根这个事儿，只限在喝酒的时候就可以了，用流动相的时候，千万别想着把福根全用掉。好吧，这是为什么呢？
配制方法很麻烦的流动相做到最后几个样品的时候见底了，再配点，还是咬牙看看能不能用福根挺过去？毕竟配流动相不像倒杯开水那么简单，这个时候，配还是不配，是个问题...问题的答案是，还是配点吧...
配上一些足够的流动相，第一可以消除心理上的担心，第二是，如果是一瓶流动相用了比较长时间，那么在页面最上面接触空气的地方可能会由于气体溶解或者挥发造成浓度或pH的微小变化，虽然大多数时候，还是那五个字，但是如果真的那么不幸产生了不良影响，这批样品估计就要前功尽弃了，比如说你在做重现性...
当然，其实，最简单的办法是...在实验之前算好流动相的消耗，在多加上1～200mL的余量，基本就可以消除这种担心了
另外一种福根，恐怕是更常见的了，那就是有机相的福根，因为有机溶剂通常比较贵，所以大家在往瓶子里添加有机溶剂的时候，通常都不会把福根到掉，这个时候，问题就出现了：每次新加的有机溶剂里总会残存一些旧的福根，大家觉得，这个可能又是那五个字的事儿了，不过，这还真是个事儿...因为有机溶剂虽然不会像水相溶剂一样长菌或者发生pH改变，但是有机溶剂也会存在变质的问题，比如乙腈，在光线充足，温度合适的情况下，自己会聚合产生沉淀；在比如有些有机溶剂比如THF，放得久了就会被氧化掉...这些沉淀，变质的东西会跟着福根一起被添加到新的流动相里，导致实验结果出问题，那个时候，换掉整瓶流动相的代价可就比重复利用福根大得多了。
所以，对于福根的态度就是：酒虽然是福根好，但流动相还是全新的靠谱...

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第四禁：直接替换管路里的流动相

这里说的直接替换，是指直接拿掉旧瓶子的流动相，换上个新瓶子装的流动相，这又有什么问题？好吧，其实绝大部分时候，还都是那五个字...这都不是事儿...水娃和火娃不是好兄弟么- -！
但是，如果新的流动相和旧的流动相不是同一种，那就要格外小心了，尤其是以下这些情况，一定要先进行流动相的替换，不然，去看看十万个冷笑话，水娃和火娃也会翻脸的...
第一种情况，不同种类缓冲盐：管路里的旧缓冲盐可能污染新的缓冲盐，造成pH的变化，甚至，如果是用过离子对试剂的流动相，那可就更没谱啦...很简单，纯水替换即可
第二种情况，缓冲盐换有机溶剂，或者倒过来，有机溶剂换缓冲盐，这种互换最容易产生的问题就是在管路里产生沉淀，因为缓冲盐里的盐是无法溶解在有机溶剂里的，替换的溶剂还是用水就可以了
第三种情况，正反相溶剂的替换，这个就比较麻烦了，因为正反相溶剂基本都是不互溶的，梁子很深，见面就打，所以必须得有个和事佬在中间做替换，这个和事佬叫做异丙醇。

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第五禁：配方潦草

流动相配方最关键的问题不是字好看，而是些的详细准确，比如，如果我写上一笔“磷酸盐1g溶解到500mL水里”这大概就是天书一样的存在：
因为流动相常用的磷酸盐有钾盐和钠盐，到底该用那种？好吧，其实我又要说，在绝大部分情况下，对于钾盐和钠盐的区别，天空还是会飘来那五个字...
但是接下来，磷酸盐有不含氢的盐，一氢盐，二氢盐三种存在，到底用哪种？这时候，天空会飘来另外五个字：这是个大事儿...
于是，我改成“磷酸二氢钾1g溶解到500mL水里”，这样看上去就不潦草了嘛...
可是，你拿着我的配方找到一瓶子磷酸二氢钾，赫然发现这货带了12个结晶水，而旁边还有一瓶写着“无水磷酸二氢钾”，到底选谁？又纠结上了不是...
于是我再改一版配方：“无水磷酸二氢钾1g溶解到500mL水里”...这下终于明白了，不会搞错了...
来源：液相色谱达人馆