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主题：【咨询】共聚焦显微拉曼用514激光器已经得到较好的光谱了，这跟用532的激光器效果是不是差不多的？

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发表于：2018/04/24 13:45:25 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我不清楚，514的跟532的区别是不是非常大，目前没有找到532的拉曼仪，只用了514的做了次实验，效果不错的。未来却要用532的。。。。。。我觉得514的既然做出来了，532的应该没啥问题，是这样吗？？
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2018/4/30 12:03:49 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
514和532纳米差不多，之前532这种固体激光器的单色性不好，所以都采用514纳米这种气体激光器，现在532纳米性能好了，而且体积小，耗电低，寿命长，所以都用532纳米
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2018/5/10 11:22:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 拉曼论坛(nanbowan) 发表:
514和532纳米差不多，之前532这种固体激光器的单色性不好，所以都采用514纳米这种气体激光器，现在532纳米性能好了，而且体积小，耗电低，寿命长，所以都用532纳米谢谢版主，实际的情况是：后来找到了532的显微拉曼做了一次实验，虽然样品批次不同（制备过程完全一样），操作人员不同，仪器厂家不同，but。。。。实验效果跟514的差距很大呢，不如514的好呢。还需要再多做一两次验证时实验才安心。而且532做出来的谱图荧光背景明显比514的大，这跟理论相反呢，不好解释呢。。。。。按理说，激光波长越短，荧光背景越大呢，是不。
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2018/5/11 8:27:39 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方便把实验结果和大家分享一下吗？如果真的出现这种情况，有可能是激光器的问题，也可能是仪器的问题。
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2018/5/14 9:56:32 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一次514的拉曼
532的拉曼第二次514的拉曼
图1是我第一次用雷尼绍invia显微共聚焦的拉曼仪做的实验，样品是培养了16小时的细菌悬浮液（高速离心后的洗干净的细菌沉淀，纯细菌，超高浓度的）。跟文献中该细菌菌种的拉曼图谱对比了，峰位基本吻合（超级开心，狂吃3天！）。后来老板让我重新用532的拉曼仪做次实验。这次重新制样，但样品制备过程一毛一样，因为雷尼绍的仪器没有532的激光器，后找到了HORIBA的拉曼仪，做了532的拉曼检测，效果如图2.荧光背景挺强的哈，采集同一个点，多打几个光谱基线会下降，形状没变！因为我觉得532的效果不好，但是由于样品批次不同，又重新安排了这个样品的514的拉曼实验再次验证，还是用的雷尼绍invia，操作人员换掉了（这次是研一小师妹，第一次是一位经验丰富的老师），光谱图如图3.
    现在跟老板讨论，觉得还是514的对于细菌这个体系检测效果最好。
    目前我还有些疑问：
1. 514和532的拉曼光谱荧光背景形状走势是不是不同？就跟我的实验效果似的。
2. 514和532的图谱都有荧光背景，能看出来哪个更好吗？？
3. 一般测试生物样品，哪个激光效果最好呢？
望前辈们指点哈~~
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2018/5/15 14:30:25 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
514和532的荧光背景形状走势不同很正常，因为横坐标对应的发射波长不一样啊，再说两个激光波长对样品的荧光激发效率也不一样，激发荧光的激发光能量不是连续的，不是波长越短荧光越强，要看激光的波长与样品的最佳激发波长接近程度；

514激发荧光峰还没出现，532已经出现，514更合适一些；

像你这个样品有荧光，两个激发波长都不合适，你可以试试633和785nm  或325nm，看能不能规避荧光

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2018/5/15 14:31:40 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
荧光影响太强，把拉曼峰给掩盖了
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2018/5/16 9:47:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliu0198(liuliu0198) 发表:
514和532的荧光背景形状走势不同很正常，因为横坐标对应的发射波长不一样啊，再说两个激光波长对样品的荧光激发效率也不一样，激发荧光的激发光能量不是连续的，不是波长越短荧光越强，要看激光的波长与样品的最佳激发波长接近程度；

514激发荧光峰还没出现，532已经出现，514更合适一些；

像你这个样品有荧光，两个激发波长都不合适，你可以试试633和785nm  或325nm，看能不能规避荧光

谢谢前辈，有点懂了，哈哈。多做实验吧，下回再用532的实验下。785的做过了，木有信号挖，都是玻璃片的。其他波长的木有条件做~~
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2018/5/16 15:42:11 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
激光功率是多少，532纳米激发，荧光背底会随着时间下降，可能是532纳米激光功率太高了，你试一试低功率。
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灵修isme
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2018/5/17 13:45:23 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 拉曼论坛(nanbowan) 发表:
激光功率是多少，532纳米激发，荧光背底会随着时间下降，可能是532纳米激光功率太高了，你试一试低功率。
测532的时候，记得是满功率，具体忘记是多大了。测514是10mw，满功率。下周还会去做下532的，可以试一下低功率。但是对于样品制备，我一直是一种方法，就是细菌悬浮液离心后，移液枪取少量至玻璃片自然干燥10分钟，就直接测了，目测表面不是非常平。下次尝试一下压片的方式，希望能有啥好结果吧~~如果有前辈做过类似的工作，希望可以分享一下这方面的小窍门啥的，感激~~
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授啦
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2019/2/15 9:20:21 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以用1064的激发波长，我司已经在1064的显微拉曼光谱仪得到了很多科研院校的应用
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