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主题：【求助】用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离

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书虫90
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发表于：2018/08/11 13:54:47 楼主 管理 分享 倒序浏览 查看全部 回复 私聊
用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离，请各位大神帮忙看看是什么原因导致的
样品：多肽酸水解后通过0.45um膜，取其续滤液
色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse AAA  4.6*150mm  5um
流动相：A相：40mM NaH2PO4 (pH=7.8) 
              B相：甲醇：乙腈：H20=45:45:10
NaH2PO4 是国药分析级，甲醇、乙腈是色谱纯，H2O是密理博纯水仪制水
检测波长：338nm、262nm
流速：2.0ml/min
柱温： 40℃
梯度  时间min    A            B
            0          100            0
          1.9          100            0
          18.1          43            57
          18.6          0            100
          22.3          0            100
          23.2          100            0
          26            100            0
问题一、色谱柱使用了一段时间后在7-9min出现鼓包，影响了氨基酸的定量
问题二、重现不了安捷伦的图谱，Gly/Thr、Val/Met、Phe/Ile达不到基线分离。
以下图谱 依次为：基线鼓包的标准品图谱、正常标准品图谱、基线鼓包的空白、三组氨基酸没有基线分离、安捷伦分析包标准品图谱
基线鼓包的标准品图谱正常的标准品图谱基线鼓包空白三组氨基酸没达到基线分离安捷伦分析包标准品图谱安捷伦分析包标准品图谱
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dadgoh
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2018/8/13 9:56:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 查看全部 回复 私聊
原文由 书虫90(v2847808) 发表:冲洗一个晚上没有效果，很揪心。有时冲2天才冲干净，用不了多久    又有鼓包。柱子是刚买的。重现不了分析包分离效果
冲洗可另设梯度，流量小谢更有利。
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