主题:【讨论】想请教一下,反相色谱中,为什么增加有机相比例,洗脱能力就会加强呢?

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bencen
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按我的理解,色谱之所以可以分离,是因为物质在固定相和流动相的分配系数导致的。那我就想,如果某样物质,它极性较高,倾向于溶于水,如果增加有机相,不就溶解度下降了吗?那是不是出峰时间也是提前呢?想不明白。
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moviehua
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夏天的雪
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夏天的雪
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反相色谱:反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
夏天的雪
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原文由 moviehua(moviehua) 发表:
正反相是物质相对于流动相以及柱子吧?
反相与正相的区别在于,固定相与流动相的极性大小。
反相:固定相的极性小于流动相的极性
正相:固定相的极性大于流动相的极性
hujiangtao
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hnteng
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  楼主出现这样的误解很正常。

我来解释下。

你所说的溶解度,相对于流动相来说不是事。你不要从溶解度方面去考虑出峰的问题。因为要测的物质是非常非常少的,无论是水和有机相中都有一定的溶解就行。只有极个别的例外。所以,测量时溶解度根本就不是一个问题。换言之,无论怎么调比例,一般物质都能溶解。

反相色谱,就是柱子的填料是非极性的,而流动相是极性的。但是流动相一般是由甲醇(或乙腈)与水以一定比例组成的。相对于水而言,甲醇(或乙腈)的极性比较小。在反相色谱柱上,极性较小的流动相对于物质的争夺能力强,那这样,待测物被流动相带走的时间就短,保留时间就短了。

这一点,我们在TLC上也可理解。TLC一般就是硅胶板的。硅胶是极性的。那么如果我们用极性较小的展开剂,那就展不开。如果用极性大的,就容易展开。

那么,道理简单得很:只要流动相的极性与色谱柱(或曰固定相)极性越接近,争夺能力越强,就越容易洗脱物质,那物质的保留时间就越短,出峰就早。

如果你理解了,可以推测一下下面这个情况:

  假如色谱柱是正相柱(也就是极性大的),现在流动相由正己烷和异丙醇组成。正己烷是非极性的,异丙醇是极性的。现在一个物质在这个色谱柱上测,保留时间太长了,我想让它早点出峰。是增加正己烷的比例还是增加异丙醇的比例?如果你能答出,就说明你真正理解了。
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2018/10/10 17:30:16 Last edit by hnteng
bencen
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原文由 hnteng(hnteng) 发表:
  楼主出现这样的误解很正常。

我来解释下。

你所说的溶解度,相对于流动相来说不是事。你不要从溶解度方面去考虑出峰的问题。因为要测的物质是非常非常少的,无论是水和有机相中都有一定的溶解就行。只有极个别的例外。所以,测量时溶解度根本就不是一个问题。换言之,无论怎么调比例,一般物质都能溶解。

反相色谱,就是柱子的填料是非极性的,而流动相是极性的。但是流动相一般是由甲醇(或乙腈)与水以一定比例组成的。相对于水而言,甲醇(或乙腈)的极性比较小。在反相色谱柱上,极性较小的流动相对于物质的争夺能力强,那这样,待测物被流动相带走的时间就短,保留时间就短了。

这一点,我们在TLC上也可理解。TLC一般就是硅胶板的。硅胶是极性的。那么如果我们用极性较小的展开剂,那就展不开。如果用极性大的,就容易展开。

那么,道理简单得很:只要流动相的极性与色谱柱(或曰固定相)极性越接近,争夺能力越强,就越容易洗脱物质,那物质的保留时间就越短,出峰就早。

如果你理解了,可以推测一下下面这个情况:
  假如色谱柱是正相柱(也就是极性大的),现在流动相由正己烷和异丙醇组成。正己烷是非极性的,异丙醇是极性的。现在一个物质在这个色谱柱上测,保留时间太长了,我想让它早点出峰。是增加正己烷的比例还是增加异丙醇的比例?如果你能答出,就说明你真正理解了。
增大异丙醇。谢谢你详细的解答~我现在明白了~

hejiahuan
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Insm_be9c2d38
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原文由hnteng(hnteng)发表:  楼主出现这样的误解很正常。

我来解释下。

你所说的溶解度,相对于流动相来说不是事。你不要从溶解度方面去考虑出峰的问题。因为要测的物质是非常非常少的,无论是水和有机相中都有一定的溶解就行。只有极个别的例外。所以,测量时溶解度根本就不是一个问题。换言之,无论怎么调比例,一般物质都能溶解。

反相色谱,就是柱子的填料是非极性的,而流动相是极性的。但是流动相一般是由甲醇(或乙腈)与水以一定比例组成的。相对于水而言,甲醇(或乙腈)的极性比较小。在反相色谱柱上,极性较小的流动相对于物质的争夺能力强,那这样,待测物被流动相带走的时间就短,保留时间就短了。

这一点,我们在TLC上也可理解。TLC一般就是硅胶板的。硅胶是极性的。那么如果我们用极性较小的展开剂,那就展不开。如果用极性大的,就容易展开。

那么,道理简单得很:只要流动相的极性与色谱柱(或曰固定相)极性越接近,争夺能力越强,就越容易洗脱物质,那物质的保留时间就越短,出峰就早。

如果你理解了,可以推测一下下面这个情况:

  假如色谱柱是正相柱(也就是极性大的),现在流动相由正己烷和异丙醇组成。正己烷是非极性的,异丙醇是极性的。现在一个物质在这个色谱柱上测,保留时间太长了,我想让它早点出峰。是增加正己烷的比例还是增加异丙醇的比例?如果你能答出,就说明你真正理解了。
是增大异丙醇的比例吗?
检测老菜鸟
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我们一般用反相色谱,会有增加有机相比例出峰早的情况,但是也不一定都适用,比如,溶液PH,离子对试剂等,这些影响洗脱效果的时候要另外考虑
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