在不连续PAGE电泳中的三大物理效应:
1、样品浓缩效应
1)凝胶孔径不连续性:在3层凝胶中样品胶及浓缩胶为大孔径胶,在2层凝胶中样品/浓缩胶为大孔径胶,分离胶为小孔径胶;在电场作用下,被分离物在大孔径中移动遇到阻力小,移动速度快,当进入小孔径胶时,被分离物移动受到阻力大,移动速度变慢,因而在两种胶的交界处,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。
2)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性:在浓缩胶中,由于被分离物的pI介与前导离子与尾随离子的pK之间,共同向正极移动,并被浓缩成极窄的区带里。
3)电位梯度的不连续性:在不连续系统中,电位梯度的差异是自动形成的。电泳开始后,由于前导离子的迁移率最大,就会很快超过被分离物,因此在快离子后面,形成一个离子浓度低的区域,这时就有了较高的电位梯度。这种高电位梯度使后面被分离物和尾随离子在前导离子后面加快移动。当前导离子、被分离物和尾随离子的移动速度相同时,建立一种稳定状态,这时在前导离子和尾随离子之间形成一个稳定而又不断向正极移动的界面,这就是样品被浓缩的中间层。