主题：【讨论】四环素类兽药残留检测探讨

我有检,不过现在是采用日本方法,以前也用过国标,不过没得不理想,现在用荧光检测器做,缓冲盐为咪唑,效里还可以.但是总感觉不是很理想,觉得峰面积太小了.

我也有日本的测定方法,但是小柱国内什么地方有买?这种方法的检测限有多少?

原文由 tinaly 发表:
我也在做，但标准品的峰拖尾很厉害或者峰很宽。流速1ml/min,乙腈：磷酸二氢钠（pH=2.5)=30：70  柱温：37  波长：355 柱子：Hypersil ODS 5um 4.6*250mm 。不知道是柱子问题还是条件问题，请各位大虾执教，谢谢！

在流动相中加入0.1mol/L的草酸能改善峰形。

cool staff

四环素比较麻烦的，没有什么更好的方法，过HLB（6cc，200mg）的柱子效果还不错，就是过柱很慢，需要净化上样溶液，一般推荐使用高速冷冻离心机离心后再上样。

我使用的是ENVI-18柱萃取净化的,可是效果很不好啊,不知道为什么,请指教!!!

用HLB的小柱效果很好啊，回收率很高的。

HLB柱即可，还可以分析强力霉素。
但现在存在着EDTA提取液在过柱的时候，存在着堵塞现象，不知道各位有什么好的办法解决？

四环素类兽药残留检测
这个方法希望可以对大家有帮助

四环素检测试纸卡（奶）说明
【简介】
四环素（Tetracycline）可透过胎盘屏障进入胎儿体内，沉积在牙齿和骨的钙质区内，引起胎儿牙齿变色，牙釉质再生不良及抑制胎儿骨骼生长，该类药物在动物中有致畸胎作用。四环素还可自乳汁分泌，乳汁中浓度较高，对乳儿有潜在的发生严重不良反应的可能。在牙齿发育期间，四环素可在任何骨组织中形成稳定的钙化合物，导致恒齿黄染、牙釉质发育不良和骨生长抑制。国家规定，牛乳中的四环素类药物的残留限量为100ng/ml（100ppb）。
【测定原理】
本品采用免疫层析技术，通过单克隆抗体竞争结合四环素偶联物和牛乳中可能含有的四环素的原理。试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的四环素偶联物和被胶体金标记的抗四环素单克隆抗体。
【样品制备】
第1步  将采集的样品进行编号，放于常温（20-30℃）室内。低温牛乳的流动性差，不适合进行试纸层析检测。
第2步  用吸管（吸管1）取1ml摇匀样品，加入离心管内，然后扣紧离心管盖，对称放入离心机转头内，3000rpm离心3-4min，直至离心管溶液顶部出现明显的脂肪层。
第3步  用吸管1插入离心管脂肪层液面下5mm处，准确定量吸取脱脂牛乳样品至吸管刻度线位置。
第4步  从塑料筒内取出所需数量的反应小杯，撕去杯面的密封膜。将吸取的牛乳全部滴入反应小杯中，用吸管将反应小杯中的溶液进行反复吸放，直至小杯底部及四壁的红色物质全部溶解并混合均匀约一分钟，即得待检样品。

【操作步骤】
1.在检测前先完整阅读说明书，使用前将本品和待检品恢复至室温。
2.打开包装袋，平放在桌面上，请在1小时内尽快地使用。
3.用滴管吸取待检样品，滴加2-3滴于加样孔中，加样后开始计时。
4.结果应在5分钟时读取，超过10分钟的时间判读无效。
【结果判定】
阳性：位置C显示出红色线条，而位置T不显色时，或者当位置C隐约显示且颜色明显浅于C时，判为阳性（含量超过100ng/ml）。
阴性：位置C显示出红色线条，位置T同时显示出红色线条，且T线颜色接近C线或者深于C线时，判为阴性（含量低于100ng/ml）。
无效：位置C不显示出红色线条，无论位置T显示情况判无效。建议使用新的试纸卡按本说明书要求重新测试。
【特异性】
1.    用100ug/ml氯霉素、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类等药物检测结果显示均呈阴性。
2.    用浓度500ng/ml以上的金霉素，100ng/ml以上的土霉素检测结果阳性。