摘要：目的：超高效液相色谱串联质谱技术建立同时测定葡萄酒中29种单体酚的快速检测方法。方法：样品经过酸化甲醇水稀释高速离心后取上清液进样分析，使用ACQUITY UPLC^®BEH C18色谱柱洗脱分离，流动相为0.1 %甲酸乙腈和0.1 %甲酸水，电喷雾式离子源负离子模式，多反应检测；离子源温度（TEM）：500 ℃；电喷雾电压（IS）：-4500 V；气帘气（CUR）：40 psi；碰撞气：Medium；雾化气：60 psi；辅助加热气：50 psi，分析时间17 min。结果：29种单体酚的定量限在0.001 mg/L ~ 0.01 mg/L之间，线性相关系数R²均大于0.999，加标回收率在90% ~ 105%之间，RSD在0.26 ~ 7.13之间，结论：该方法前处理简便、灵敏度高、分析时间短，精密度和准确性良好，可用于葡萄酒中29种单体酚的同时检测。
关键词：单体酚；葡萄酒；超高效液相色谱串联二级质谱（UPLC-MS/MS）
Establishment of UPLC-MS/MS Method for Determination of 29 Monophenols in Wine Abstract

YANG Zhiwei, WANG Shengyi, QI Pengyu, ZHANG Ang^*, LI Xiang, WANG Fei, ZHANG Jinjie

(Inspection and Quarantine Technique Centre, Qinhuangdao Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of P.R. China, Qinhuangdao, Hebei, 066004, China)

Abstract: To establish a rapid method for simultaneous determination of 29 phenols in wine by UPLC-MS/MS. Methods: The sample was diluted with acidified methanol water, centrifuged at high speed, and the supernatant was taken for injection analysis, elution separation using an ACQUITY UPLC® BEH C18 column, the mobile phase was 0.1% formic acid acetonitrile and 0.1% formic acid water, electrospray ion source negative ion mode, multiple reaction detection; ion source temperature(TEM): 500 ℃; electrospray voltage (IS): -4500 V; air curtain gas (CUR): 40 psi; gollision gas: medium; atomized gas: 60 psi; auxiliary heating: 50 psi, analysis time: 17 min. Results: The quantitative limit of 29 monomer phenols was between 0.001 mg/L and 0.01 mg/L, the linear correlation coefficient R² was greater than 0.999, the standard recovery was between 90% and 105%, and the RSD was between 0.26 and 7.13. Conclusion: This method was characterized by simple operation, high sensitivity, fast analysis and short time. This method also has good precision and accuracy and can be applied to detect 29 monophenols in wine.
Keywords: Mono-phenolic compounds; Wine; UPLC-MS/MS
多酚类化合物是葡萄的重要次生代谢产物和葡萄酒中重要组成成分，主要来源于葡萄、微生物发酵和橡木桶，直接关系着葡萄酒的贮藏时间、色泽、苦味、收敛性等特性，同时具有抗癌、清除自由基及预防心血管疾病等多种功能^[2^-4^]，是葡萄酒中营养成分的主要来源。因此分析葡萄酒中酚类物质的种类和含量，建立同时快速、准确分析葡萄酒中多种酚类物质的方法，可以为葡萄酒行业及相关检测机构提供真伪鉴别和等级评定新方法，对全面评价葡萄酒品质有重要意义^[^5-6^]。
酚类化合物是含有酚官能基团的物质，葡萄酒中酚类化合物根据结构不同主要分为非类黄酮类和类黄酮类^[⁷^]，其中类黄酮类根据其分子结构可分为黄酮醇、花色素、黄烷醇类；非类黄酮类主要为酚酸类化合物^[⁸^,⁹^]。葡萄酒中酚类物质种类和含量受选用葡萄品种、酿造方式、陈酿方式等因素影响。
目前国内关于葡萄酒中单体酚的定性和定量检测，主要有高效液相色谱法^[¹²^]（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）、高效液相色谱串联质谱技术（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS）和超高效液相色谱法^[1⁶^,1⁷^]（Ultra-high performance liquid chromatography，UPLC）等。许婷婷^[1⁸^]等利用HPLC法研究了葡萄酒中9种单体酚的检测方法，检测单体酚种类少且回收率较低；孙翔宇^[1⁹^]等利用RP-HPLC法和HPLC-MS法同时测定葡萄酒中16种单体酚含量，检测单体酚种类较少且时间长；张星星^[1⁴^]等利用UPLC法测定葡萄酒中17种酚类物质，该方法检测时间较短，但由于葡萄酒中受多种成分影响，很难将全部单体酚分离，因此仅通过保留时间色谱图分析对定量结果影响较大。
UPLC-MS/MS技术可以在HPLC-MS基础上进行两次质量数筛选，尽可能降低背景噪音。这种技术的检测灵敏度高，近年来以缩短检测时间、分离能力强等优点迅速发展^[²⁰^,²¹^]。目前国内外学者利用UPLC-MS/MS在检测药物或食品中酚类物质的研究较多，Maric T^[²⁵^]等使用UPLC-MS/MS建立了从植物粗提物中原花青素的快速定性定量方法；罗益远^[²⁶^]等利用UPLC-MS/MS技术建立测定何首乌中二苯乙烯、蒽醌、黄酮和酚酸等共14种目标成分的方法；Nàdia O^[²⁷^]等对UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS测定可可样品中原花青素和生物碱进行比较，结果表明，UPLC-MS/MS技术能够在小于12.5 min内以低浓度水平测定原花青素含量。
故本试验采用UPLC-MS/MS技术建立快速定性定量分析葡萄酒中29种单体酚的测定方法，以期为葡萄酒中多种单体酚类化合物的同时检测提供新方法，为葡萄酒相关研究提供方法学基础。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
单体酚标准品（纯度 ≥ 95%）：没食子酸（Gallic acid，GA）、原儿茶酸（Protocatechuate acid，PA）、(+)-儿茶素（(+)-Catechin，CA）、(-)-表儿茶素（(-)-Epicatechin，EC）、(-)-表没食子儿茶素（(-)-Epigallocatechin，EGC）、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯（(-)-Epigallocatechin gallate，EGCG）、(-)-表儿茶素没食子酸酯（(-)-Epicatechin gallate，ECG）、咖啡酸（Caffeic acid，CAA）、反式阿魏酸（trans-Ferulic acid，FA）、对香豆酸（trans-p-Coumaric acid，p-CA）、绿原酸（Chlorogenic acid，CGA）、顺式白藜芦醇（cis-Resveratrol，cis-Res）、反式白藜芦醇（trans-Resveratrol，trans-Res）、顺式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（Resveratrol-3-O-β-D-glycoside，Res-3-Gly）、山柰酚（Kaemperol，Kae）、槲皮素（Quercetin，Que）、槲皮素-3-O-葡萄糖苷（Quercetin-3-glucoside，Que-3-Glu）、杨梅素（Myricetin，Myr）、桑色素（Morin hydrate，Mor）、漆黄素（Fisetin，Fis）、芹菜素（Apigenin，Api）、木犀草素（Luteolin，Lut）、牡荆素-2-O-鼠李糖苷（Vitexin，Vit）、原花青素B1（Procyandin B1，Pro B1）、原花青素B2（Procyandin B2，Pro B2）白皮杉醇（Piceatannol，Pic）、香草酸（Vanillic acid，VA）、葡萄素（Viniferin，Vin）、紫铆因（Butein，But）德国Sigma-aldrich公司。
1.2 仪器与设备
30-AD液相色谱日本岛津公司；AB Sciex Triple Quad™ 4500三重四极杆—线性离子阱复合质谱仪（配有电喷雾离子源、Turbo V离子源和Analyst 1.5 数据处理系统）美国AB Sciex公司；ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱（2.1 × 100 mm，1.7 μm）美国Waters公司；Milli-Q去离子水机美国Millipore公司；3-30KS超高速离心机美国热电公司。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件
柱温为30 ℃，进样体积10 μL，流速0.25 mL/min，C18色谱柱（2.1 × 100 mm，1.7 μm，）分离，根据单体酚性质确定流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：0.1%甲酸乙腈。洗脱程序：0.00 ~ 3.00 min，5% B；3.00 ~ 6.00 min，30 % B；6.00 ~ 9.00 min，50% B；9.00 ~ 12.00 min，70% B；12.00 ~ 17.00 min，5% B。
1.3.2 质谱条件
离子源：电喷雾式离子源（ESI）；扫描方式：负离子模式；检测方式：多反应检测(MRM)；离子源温度（TEM）：500 ℃；电喷雾电压（IS）：-4500 V；气帘气压力（CUR）：40 psi；碰撞气：Medium；雾化气：60 psi；辅助加热气：50 psi。
1.3.3 单体酚标准溶液和基质液配制
将29种单体酚的标准品使用0.1%甲酸甲醇配制成100 mg/L的标准储备液，于-20 ℃保存。使用时将单体酚标准储备液使用10%甲醇水（含有0.1%甲酸）逐级稀释成所需浓度标准工作液或混合标准工作液。
将150 mL乙醇和3 g酒石酸移入1 L的容量瓶中，去离子水定容，得到模拟酒样，使用时取出适量模拟酒样，再加入目标浓度的单体酚的单标或混标使用。
1.3.5 样品前处理
取1 mL待测酒样用10%甲醇溶液（含0.1%甲酸）稀释100倍，在26 000 r/min条件下离心5 min后取上清液进行初步测定，根据测定结果重新取样1 mL稀释至适当浓度重复离心，离心后取上清液至进样瓶等待测定。
2 结果与分析
2.1 前处理优化
由于直接进样中杂质会对仪器造成影响，而微孔滤膜过滤会对单体酚产生吸附，本试验采用尼龙66滤膜，GHP（亲水性聚丙烯）滤膜，聚醚砜滤膜和超高速离心沉淀去除杂质后进样的结果进行比较，结果见图1。
根据试验结果可知，每种滤膜对不同单体酚的吸附程度存在差异，其中尼龙66滤膜对这29种单体酚的吸附率为36.99 % ~ 67.59 %，GHP（亲水性聚丙烯）的吸附率为39.12 % ~ 71.03 %，聚醚砜的吸附率为31.56 % ~ 77.39 %，由于3种不同材质微孔滤膜均会对样品产生明显吸附作用，因此为实现标准物质对目标物准确定性定量，本试验选择超高速离心沉淀后直接进样的前处理方法。

图1 3种滤膜与直接进样比较

Fig. 1 Comparison of 3 kinds of filter membranes with direct injection

2.2 质谱参数优化
采用注射泵直接将标准溶液注入离子源的方式对29种单体酚质谱参数进行优化。

分别将29种单体酚浓度为1 mg/L标准工作液以0.01 mL/min流速将标准工作液注入离子源，负离子化模式下对每种单体酚进行一级质谱分析（Q1），得到母离子峰。在进行目标离子二级扫描（MS2），得到碎片离子。

选取响应最高的两个碎片离子用于定性与定量，进行条件优化得到射入电压（EP）碰撞电压（CE）碰撞室射出电压（CXP）去簇电压（DP）等相关参数，优化后29种单体酚质谱参数见表1。

表1 29种单体酚质谱参数

Table 1 Mass Spectrometry Parameters of 29 Monomer Phenols

序号	名称	母离子（DA）	碎片离子（DA）	DP (VOLTS)	EP (VOLTS)	CE (VOLTS)	CXP (VOLTS)
1	GA	168.778	124.9^*	-55	-10	-20	-11
			79			-28	-7
2	PA	152.794	108.9^*	-55	-10	-20	-9
			107.9			-32	-9
3	CA	288.861	244.9^*	-90	-10	-20	-11
			202.9			-26	-15
4	EA	288.861	244.9^*	-90	-10	-20	-11
			202.9			-26	-15
5	EGC	304.872	124.9^*	-100	-10	-26	-11
			164.9			-24	-13
6	EGCG	456.912	168.8^*	-100	-10	-22	-13
			125			-48	-9
7	ECG	440.89	288.8^*	-105	-10	-22	-11
			168.9			-24	-41
8	CAA	178.792	134.9^*	-60	-10	-20	-11
			133.9			-32	-11
9	FA	192.804	133.9^*	-60	-10	-22	-9
			177.9			-18	-3
10	P-CA	162.792	118.9^*	-20	-10	-20	-9
			92.9			-40	-7
11	CGA	352.901	190.9^*	-75	-10	-20	-7
			85			-52	-7
12	cis-Res	226.815	184.9^*	-150	-10	-26	-11
			143			-32	-13
13	trans-Res	226.815	184.9^*	-150	-10	-26	-11
			143			-32	-13
14	Res-3-Gly	388.955	227^*	-100	-10	-22	-9
			184.9			-48	-15
15	Kae	284.833	116.9^*	-110	-10	-50	-9
			92.9			-58	-7
16	Que	300.832	150.9^*	-100	-10	-28	-9
			178.8			-24	-13
17	Que-3-Glu	462.886	299.8^*	-135	-10	-36	-11
			270.8			-56	-19
18	Myr	316.815	150.9^*	-120	-10	-32	-11
			178.9			-26	-13
19	Mor	300.811	150.9^*	-65	-10	-28	-13
			124.9			-28	-17
20	Fis	284.833	134.9^*	-110	-10	-28	-11
			120.9			-32	-11
21	Api	268.931	116.9^*	-95	-10	-38	-11
			150.9			-32	-11
22	Lut	284.846	132.9^*	-75	-10	-42	-11
			131.9			-68	-11
23	Vit	576.957	292.9^*	-140	-10	-46	-9
			412.9			-32	-15
24	Pro B1	576.845	288.9^*	-155	-10	-30	-11
			406.9			-32	-13
25	Pro B2	576.845	288.9^*	-155	-10	-30	-11
			406.9			-32	-13
26	Pic	242.89	158.9^*	-80	-10	-36	-11
			200.9			-28	-9
27	VA	166.806	151.8^*	-50	-10	-18	-7
			107.9			-24	-9
28	Vin	452.969	346.9^*	-140	-10	-30	-13
			358.9			-28	-13
29	But	270.887	134.9^*	-85	-10	-24	-9
			134			-56	-9

注：*: 定量离子; GA: Gallic acid; PA: Protocatechuate acid; CA: (+)-Catechin; EC:(-)-Epicatechin; EGC: (-)-Epigallocatechin; ECG: (-)-Epicatechin; gallate; EGCG: (-)-Epigallocatechin gallate; CAA: Caffeic acid; FA: trans-Ferulic acid; p-CA: trans-p-Coumaric acid; CGA: Chlorogenic acid; cis-Res: cis-Resveratrol; trans-Res: trans-Resveratrol; Res-3-Gly: Resveratrol-3-O-β-D-glycoside; Kae: Kaemperol; Que: Quercetin; Que-3-Glu: Quercetin-3-glucoside; Myr: Myricetin; Mor: Morin hydrate; Fis: Fisetin; Api:Apigenin; Lut: Luteolin; Vit: Vitexin; Pro B1: Procyandin B1; Pro B2: Procyandin B2; Pic: Piceatannol; VA: Vanillic acid; Vin: Viniferin; But: Butein.
2.3 色谱条件优化
由表1可知，通过质谱参数已经可以将大部分单体酚进行定性定量分析，但仍有少部分同分异构体结构无法通过离子对区分，因此需要选择最佳色谱柱和流动相进行分离，通过不同保留时间对目标化合物进行定性定量测定。
在1.3.1的实验方法下，29种单体酚总离子流图见图2，29种单体酚结构式见图3，峰号及保留时间见表2。
如图可知，使用C18色谱柱对29种单体酚混合标准液的分离条件进行优化，发现其中三对离子对质量数相同的化合物，白藜芦醇与顺势白藜芦醇、(-)-儿茶素与(+)-儿茶素、原花青素B1与原花青素B2能够良好分离。对流动相组成和甲酸等条件进行优化，结果表明采用0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水作为流动相进行梯度洗脱，得到良好峰形，基质干扰小。

图2 29种单体酚总离子流图

Fig. 2 Total ion flow diagram of 29 monomeric phenols

表2 29种单体酚保留时间及色谱峰编号

Table 2 Retention Time and Chromatographic Peak Number of 29 Monomer Phenols

峰号	R.T	名称	峰号	R.T	名称	峰号	R.T	名称
1	1.45	GA	8	4.52	EGCG	13	5.2	Myr
2	2.34	PA	8	4.61	Vit	14	5.59	Mor
3	2.71	Pro B1	9	4.75	trans-Res	14	5.6	cis-Res
4	2.92	EGC	9	4.75	Res-3-Gly	15	5.96	Lut
5	3.78	CGA	9	4.73	Que-3-Glu	16	6.07	Que
5	3.84	CA	10	4.8	ECG	17	6.89	Vin
6	4.35	Pro B2	10	4.8	p-CA	17	6.92	But
7	4.44	CAA	11	4.93	FA	18	7.08	Api
7	4.41	VA	12	5.03	Pic	19	7.25	Kae
7	4.49	EC	13	5.21	Fis

注：R.T: 保留时间; 同表1.

表3 单体酚结构式

Table 3 Structural Formulas of Monomeric Phenols

序号		名称	R1	R2	R3	R4
1		GA	OH	OH	-	-
1		PA	OH	H	-	-
2	[img=,89,91]file:///C:/Users/wangfei/LOCALS~1/Temp/ksohtml9892/wps5.jpg[/img]	EC	OH	H	OH	-
		CA	H	OH	OH	-
		EGC	OH	OH	OH	-
		EGCG	OH	OH	Gallate	-
		ECG	H	OH	Gallate	-
3		CAA	OH		OH	-
		CGA	Quinicacid		OH	-
		p-CA	OH		H	-
		FA	OH		OCH₃	-
4		trans-Res	H		-	-
		cis-Res	H		-	-
		Res-3-Gly	OGlu		-	-
5		Que	H	H	OH	O
		Kae	H	H	H	OH
		Que-3-Glu	H	H	OH	OGlu
		Myr	H	OH	OH	OH
		Mor	OH	H	H	OH
6		Fis	OH	H	OH	H
		Vit	H	ORham	H	OH
		Api	H	H	H	OH
		Lut	OH	H	H	OH
7		Pro B1		-	-	-
7		Pro B2		-	-	-
8		Vin	-	-	-	-
9		But	-	-	-	-
10		Pic	-	-	-	-
11		VA	-	-	-	-

注：-: 无; Glu: glucosea; Rham: rhamnoside; 1:在苯环上方; 2: 苯环下方; 同表1.
2.4 线性关系、检出限及定量限的测定结果
在1.3.4中模拟酒基质液中定量加入29种单体酚的混合标准溶液，分别在0.00、0.001、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500 mg/L水平浓度下测定，分别以目标化合物峰面积（y）对其相应质量浓度（x）绘制标准曲线。按照1.3.5样品前处理方法制备样品，平行6次试验，分别在0.01 mg/L、0.10 mg/L、1.00 mg/L三个浓度水平进行添加，计算加标回收率和相对标准偏差，按信噪比3:1得到目标化合物检出限，10:1得到目标化合物的定量限，结果见表4。

表4 方法学验证

Table 4 Methodological Validation

序号	单体酚	回归方程	R²	回收率/%	RSD/%	检出限/（mg/L）	定量限/（mg/L）
1	GA	Y = 95 200X + 28 400	0.998 8	90.8 ~ 96.7	6.32 ~ 7.54	0.000 3	0.001
2	PA	Y = 75 000X - 967	0.996 9	92.9 ~ 104	4.16 ~ 4.95	0.000 3	0.001
3	CA	Y = 5 650X + 2 330	0.995 8	94.6 ~ 102	2.78 ~ 3.32	0.003 0	0.010
4	EC	Y = 5 170X + 9 390	0.997 8	94.9 ~ 99.5	2.12 ~ 2.47	0.001 5	0.005
5	EGC	Y = 3 410X - 3 010	0.999 0	92 ~ 96	1.88 ~ 2.19	0.001 5	0.005
6	EGCG	Y = 17 200X - 2 940	0.997 5	91.8 ~ 102	3.79 ~ 4.52	0.001 5	0.005
7	ECG	Y = 18 400X - 8 370	0.996 0	91.4 ~ 99.5	3.00 ~ 3.53	0.000 3	0.001
8	CAA	Y = 105 000X + 48 300	0.998 2	96.4 ~ 101	2.10 ~ 2.46	0.000 3	0.001
9	FA	Y = 27 800X - 6 680	0.997 2	93.1 ~ 98	4.00 ~ 4.73	0.000 3	0.001
10	p-CA	Y = 190 000X + 26 300	0.997 8	92.4 ~ 101.4	3.54 ~ 4.16	0.000 3	0.001
11	CGA	Y = 36 500X + 294	0.996 1	95.6 ~ 99.2	1.31 ~ 1.53	0.000 3	0.001
12	cis-Res	Y = 2 120X + 2 810	0.999 5	92.8 ~ 99.4	2.64 ~ 3.13	0.000 3	0.001
13	trans-Res	Y = 5 650X - 1 270	0.996 7	93.1 ~ 102	3.23 ~ 3.82	0.000 6	0.002
14	Res-3-Gly	Y = 20 200X - 4 730	0.996 1	95.2 ~ 101.8	2.30 ~ 2.72	0.000 3	0.001
15	Kae	Y = 1 860X - 1 410	0.996 5	95.6 ~ 96.3	1.21 ~ 1.44	0.000 3	0.001
16	Que	Y = 10 300X - 10 300	0.993 9	92.5 ~ 104.5	4.82 ~ 5.65	0.000 3	0.001
17	Que-3-Glu	Y = 30 700X - 10 800	0.999 1	91.8 ~ 101.9	3.38 ~ 3.97	0.000 3	0.001
18	Myr	Y = 2 010X - 2 740	0.997 0	91.8 ~ 104.1	4.71 ~ 5.61	0.001 5	0.005
19	Mor	Y = 13 400X - 6 650	0.998 1	97.3 ~ 101	1.79 ~ 2.13	0.000 3	0.001
20	Fis	Y = 4 240X + 9 630	0.998 6	91.6 ~ 99.2	2.86 ~ 3.39	0.000 3	0.001
21	Api	Y = 18 500X + 3 510	0.998 3	94.9 ~ 99.1	1.73 ~ 2.03	0.000 3	0.001
22	Pro B1	Y = 1 530X - 192	0.996 9	98.9 ~ 99.6	0.26 ~ 0.31	0.001 5	0.005
23	Pro B2	Y = 2 000X + 406	0.999 0	94.8 ~ 102	2.60 ~ 3.07	0.000 3	0.001
24	Lut	Y = 5 770X - 4 240	0.955 1	96.8~101.1	1.78 ~ 2.09	0.000 3	0.001
25	Pic	Y = 11 400X + 5 670	0.997 3	91.8 ~ 99.1	3.00 ~ 3.55	0.000 3	0.001
26	Vit	Y = 18 200X - 7 350	0.997 7	99.1 ~ 103	1.36 ~ 1.60	0.000 3	0.001
27	VA	Y = 5 590X + 633	0.999 2	91.6 ~ 99.1	2.78 ~ 3.26	0.001 5	0.005
28	Vin	Y = 3 790X - 2 910	0.994 8	92.3 ~ 98.1	2.23 ~ 2.66	0.001 5	0.005
29	But	Y = 95 700X - 931 00	0.995 9	94.3 ~ 102	2.8 3~ 3.38	0.000 3	0.001

注：同表1.
2.4 实际样品的检测
为了验证方法可行性，对市售的27种的干红、干白与桃红葡萄酒进行检测，其中干红葡萄酒19种，桃红葡萄酒1种，干白葡萄酒7种。由于葡萄酒中的每种单体酚含量相差过大，需先将样品稀释100倍进行预实验，再根据结果分别将酒样成倍稀释，以保证每种单体酚测定结果都在线性范围内，测定结果及稀释倍数见表5，部分酒样总离子流图与标准品对照见图3。

表5 实际样品中单体酚测定结果及稀释倍数（n = 27）

Table 5 Determination Results and Dilution Times of Monomer Phenol in Actual Samples ( n = 27 )

序号	单体酚	干红葡萄酒/（mg/L）	桃红葡萄酒/（mg/L）	干白葡萄酒/（mg/L）	稀释倍数
1	PA	1.880 ~ 12.000	3.530	0.417 ~ 1.420	50
2	p-CA	1.810 ~ 8.470	4.930	0.777 ~ 5.810	50
3	VA	1.950 ~ 9.610	2.010	0.128 ~ 0.573	50
4	GA	14.400 ~ 78.500	15.400	0.351 ~ 3.050	500
5	CAA	4.240 ~ 14.100	13.200	2.160 ~ 6.620	100
6	FA	0.230 ~ 0.974	1.000	0.285 ~ 1.470	10
7	cis-Res	0.529 ~ 5.960	0.834	-	50
8	trans-Res	0.295 ~ 8.730	1.120	-	50
9	Pic	0.081 ~ 0.141	3.970	0.000~1.790	10
10	CA	9.040 ~ 50.080	21.100	1.380 ~ 5.700	500
11	EA	6.120 ~ 45.500	17.200	0.610 ~ 5.130	500
12	Que	0.470 ~ 17.300	6.220	0.019 ~ 6.21	50
13	EGC	0.651 ~ 9.280	1.000	0.076 ~ 1.470	100
14	Myr	4.120 ~ 55.700	0.579	0.000 ~ 0.136	500
15	Res-3-Gly	0.485 ~ 6.000	0.860	0.000 ~ 0.528	10
16	Que-3-Glu	0.086 ~ 5.050	0.511	0.000 ~ 0.763	10
17	Pro B1	9.570 ~ 77.300	8.080	0.241 ~ 3.910	500
18	Pro B2	4.540 ~ 49.900	7.050	0.000 ~ 1.440	500
19	总计	75.560 ~ 331.243	108.594	8.671 ~ 39.244

注：-: 未检出; 同表1.

图3 3种不同类型葡萄酒总离子流与标准品对照图

Fig. 3 Comparison chart of total ion current and standard for three different types of wine

大多数的干红葡萄酒与桃红葡萄酒可以检出原儿茶酸、对香豆酸、香草酸、没食子酸、咖啡酸、反式阿魏酸、顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、白皮杉醇、儿茶素、表儿茶素、槲皮素、表没食子儿茶素、杨梅素、原花青素B1、原花青素B2、顺式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷这18种单体酚，与张协光^[²⁸^]等和Leonhard J等人的检测结果比较，利用UPLC-MS/MS建立的方法能检出更多单体酚类物质，且检出限和定量限更低，能同时对3组同分异构体进行测定。
这18种单体酚化合物在葡萄酒中总含量在75 mg/L ~ 331 mg/L之间，其中儿茶素在多数干红葡萄酒中含量最高。干白葡萄酒所检出的单体酚种类在11 ~ 17种之间，顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、白皮杉醇、杨梅素、顺式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、原花青素 B2在部分干白葡萄酒中未检出，且检出这17种单体酚化合物总量在8 mg/L ~ 40 mg/L之间，其中没食子酸、原儿茶酸和白藜芦醇在干红葡萄酒中的检测结果范围与李巍^[²⁹^]和赵建勇等人测定结果接近。

3 结论
本实验采用UPLC-MS/MS技术建立了葡萄酒中29种单体酚定性定量的检测方法，通过仪器条件、流动相等优化考察，最终得到方法检出限在0.3 mg/L ~ 3.0 mg/L之间，定量限在1.0 mg/L ~ 10.0 mg/L之间，加标回收率在90.8 % ~ 104.5 %之间。
这种检测方法操作简便、灵敏度高、实用性强，相比于已有方法，检测时间短且检出限低，经方法学验证，该方法能满足葡萄酒中29种单体酚的日常检测要求，可应用于葡萄酒监测工作。
参考文献：

附件：

UPLC-MS MS测定葡萄酒中29种单体酚方法的建立.doc 所需积分(20)

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