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主题：【已应助】水解物的吸光度就是十分奇怪

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huangwenwei
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发表于：2020/01/17 13:10:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各路有经验的达人，非常希望 可以 不吝赐教！！！ 此问题已困扰本人许久，着实抓狂，食不知味，夜不能寐。。。还望有经验的小伙伴可以指导1,2.。。。。先行谢过！！！
具体问题如下—
底物 100ml 乳清蛋白， 胰蛋白酶。
现比较 pH/Stat 方法 和OPA测水解度的方法。 采用 pH stat 记录base的消耗量，从而计算水解度，在不同的 Time intervals 取1ml 水解物 与0.5ml抑制剂混合后，dilute 10倍，采用OPA试剂与其反应，340nm处测量absorbance. 理论上吸光度应随着水解度的increase而增加，但事实上 数据非常混乱，未水解 底物的 吸光度竟然高于水解产物。
配置了不同浓度的乳清蛋白与lysine标注曲线，线性增长十分理想，这说明opa试剂不应存在问题，而且吸光度均在0.1至1之间，也属正常，但水解物的吸光度就是十分奇怪，无法观察到增长趋势
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junxi2008
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2020/1/17 13:36:40 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过OPA测水解度的，但这个方法很常见。但因为有毒，所以我使用TNBS法，这个没有毒，还比较稳定。
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