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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】色谱柱活化

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Insm_50e7fbf6

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发表于：2020/04/09 21:52:45 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请问各位大佬，新的色谱柱活化的目的是什么，一般怎么活化，谢谢。

该帖子作者被版主轶辰加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖

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Insm_19b9a9c8

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2020/4/10 9:19:53 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相色谱柱活化的方法因柱子而异，普通反相C18柱的话我是这样活化的：1ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。液相的新色谱柱都是保存在一定的保存液中的，所谓的活化就是替换掉其中的保存液，冲洗掉柱中可能残留的其他杂质，以免影响后续分析工作。

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xiaogumd11

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2020/4/10 9:53:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对于新的液相色谱柱或是刚安装上的液相色谱柱，把流动相流速调大点，如1-2ml/min，100%甲醇，打开排空阀，冲洗30分钟以上，就相当于色谱柱的活化。

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我想当科学家

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2020/4/10 10:36:29 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般C18柱建议0.5的流速100%甲醇至少冲3-4小时，一方面可以充分浸润填料以及柱床，冲走里面的一些杂质，另外也不至于因流速过快导致柱塌陷，长期不用的柱子或新柱子用小流速缓慢冲洗比较稳妥。

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Insm_d02f971c

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2020/4/10 11:28:03 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱在出厂时都会做柱效测试，并把色谱柱保存在柱效测试溶剂中运输，拿到新主子后，要用纯有机试剂（甲醇或乙腈）进行火化平衡20个柱体积，若你所用流动线不含缓冲盐，则直接用流动相过度即可，若你所用流动相含有缓冲盐，则需要再用与你流动相配比相同的有机溶剂和超纯水来过度5个柱体积，过度时若为等梯度，则直接过度即可，若为梯度，则用初始比例就可以

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有水有渝

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2020/4/10 18:35:57 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般情况C18柱用甲醇冲洗20分钟左右就可以了，其实也没有活化啥，只要里面没有干了，直接上流动相也不会有什么问题

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m3020341

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2020/4/11 11:33:33 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看一下需要用于什么项目，看下检测项目的有机的流动相和新柱子里面的保护液是否相同，如果相同可以先用有机相低流速冲洗，再按照测试方法的有机相和水相比例冲洗，再慢慢变大流速直至到方法所需流速；如果与保护液不相同，则需要先用异丙醇进行冲洗，再改成检测项目所用方法的有机相，之后再继续。在冲柱子时，流速都要从小到大，尤其是用异丙醇时，调节要更小一点，不然柱压变化会比较大。

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2020/4/14 10:33:02 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

现在的厂商一般都会宣称自己的柱子可以直接用上机用的（大部分厂商确实这样做了的，具体做的好不好不好说），但是色谱柱一般保存期比较长，保存条件也不尽如意，所以每次用新的色谱柱都要做所谓的活化（其实就是置换一下封存液），明白这些东西也知道怎么做做到什么程度了。现在普遍做法基本都是用纯色谱纯有机试剂长时间低速冲洗（试剂早年间都是用甲醇多，现在在仪器安装的时候工程师一般会推荐你用乙腈什么的；流速在柱子的承压范围内都是可以的，看你的自己时间，有时间零点几的流速冲洗过夜都可以，没时间1.2-1.5冲1-2小时也行，当然也要看你的柱子脏不脏，主流品牌柱子基本不会存在什么问题），处理完后开机测试几针就OK了

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