主题:【已应助】安捷伦1260 梯度洗脱出现鬼峰

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杨树2
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新买一根 SinoChrom ODS-BP 250*4.6 5um的柱子,装上之后用 乙腈(0.1%三氟乙酸):水=10%~100%的梯度洗脱 220nm和254nm下 出现鬼峰 
1. 用90%乙腈 等度洗脱无鬼峰
2 用50%乙腈等度洗脱也无鬼峰
3用50%~90%的梯度洗脱出现鬼峰
推荐答案:安平回复于2022/03/28
      梯度洗脱出现的鬼峰,一般与流动相不良有关。 污染物质在较低洗脱强度下,均匀吸附在系统中。当洗脱强度增大,污染物质就会表现为色谱峰流出。


      建议处理流动相实验。一般重点怀疑流动相流经的溶剂瓶、滤头、管路、过滤器、流动相中的水相和各种添加物的纯度。

      可以代换或者设法纯化确认。

      可以考虑采购鬼峰捕集小柱,安转在色谱系统的进样器之前。

     
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mingxiaoyan
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可以参考一下:
梯度洗脱带来的“鬼峰”来源很多,其中主要来源于流动相和管路,几乎都有一个共同的机制:

  当流动相具有较高的洗脱强度时,流动相中有紫外吸收的有机杂质在柱上聚焦成组分带,并随后在梯度中洗脱。这些流动相杂质的潜在“来源”是广泛的(如有机相中污染物,水相中污染物,缓冲盐类,流动相瓶和混合过程产生等)。其他原因包括流动相输送的物理或机械方面、样品引入和固定相效应。各种来源的鬼峰,让鬼峰处理变得非常困难。

  在色谱分离中,纵向扩散会增加分离组分带宽。等度液相色谱中,尽量在纵向扩散超出接受范围之前洗脱。在梯度洗脱色谱,因为流动相配比的变化导致动态压缩组分带的主动聚焦机制(带/峰压缩)。梯度色谱运行,是峰宽扩散和聚焦同步过程的产物。

  聚焦机制可想象一个组分带广泛扩散在高效液相色谱柱的顶部。当施加溶剂梯度时,带后部的有机溶剂浓度总是高于带前部。带前的组分分子比带后的组分分子更强地被固定相保留,带后的成分分子更快移动,导致落后的组分分子会被更强的洗脱液聚集,并更快地向前移动以赶上其余的。

  带聚焦机制可聚焦流动相中存在的有机杂质。在低洗脱剂浓度下有一定保留的杂质可能会随着梯度逐渐聚集成峰。在充分聚焦后,流动相鬼峰与分析物峰形接近或相同,聚焦不完全时,它们会变得更宽或变成其他形状。理想梯度的液相色谱流动相到达梯度最大,该处应仅包含预期的溶剂和试剂,不包含其他物质。梯度高效液相色谱分析的不只是样品,也分析流动相的杂质和仪器路径的溶剂。为了区分真实的分析物峰和这些鬼峰,必须进行空白进样的检查(溶剂空白)。

xiaolanzi5
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这种情况也曾出现过,我分析是某中等极性的物质(多种来源,水,三氟乙酸,有机相等)在柱头富集,50%乙腈下洗不下来,90%乙腈下溶解在流动相中在柱子上不保留,因此这两种情况下都观察不到鬼峰,而梯度下,随着有机相比例变大,会慢慢洗下来,而观察到。
安平
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      梯度洗脱出现的鬼峰,一般与流动相不良有关。 污染物质在较低洗脱强度下,均匀吸附在系统中。当洗脱强度增大,污染物质就会表现为色谱峰流出。


      建议处理流动相实验。一般重点怀疑流动相流经的溶剂瓶、滤头、管路、过滤器、流动相中的水相和各种添加物的纯度。

      可以代换或者设法纯化确认。

      可以考虑采购鬼峰捕集小柱,安转在色谱系统的进样器之前。

     
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