采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经过若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定环境中的活微生物数，并以此来评定车间的洁净度

1、仪器设备：高压灭菌锅、恒温培养箱、直径90mm培养皿

2、准备操作：将直径90mm培养皿进行121℃湿热灭菌20min，将配置好的大豆酪蛋白琼脂培养基，装入三角瓶进行121℃湿热灭菌20min，琼脂湿热灭菌后冷却至45℃。在无菌室的超净工作台上，将培养基倒入培养皿，一般每个皿大约15mL，冷却至室温。

3、采样方法：将已经制作好的培养皿，根据车间的平面采样点布置图、车间面积和级别进行放置，采样点高度离地0.8m～1.5m，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露30min，再将培养皿盖盖上后倒置。

1）车间面积

车间面积

2）级别

3）平面采样点布置图

平面采样点布置图

4、培养：全部采样后将培养皿倒置于培养箱中培养。培养温度35℃，时间48h，每批培养基选定3个做对照培养基。

5、菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

6、注意事项

1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

2）采取一切措施防止人为对样本的污染。

3）对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

7、测试规则

1）测试状态
（1）沉降菌测试前，被测试车间的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

（2）沉降菌测试前，被测试车间已经过消毒。

（3）测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。

2）测试人员
1 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。

2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

8、菌落计数

1）用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5～10放大镜检查,是否遗漏。

2）若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数.

9、结果计算

1）用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

2）平均菌落数的计算

平均菌落数M=（M1+M2+M3+…….Mn）/n

M：平均菌落数

M1：1号培养皿菌落数

M2：2号培养皿菌落敉

Mn：n号培养皿菌落数

n：培养皿总数

10、结果评定：用平均菌落数判定。

1）车间内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

2）若车间内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

3）评定标准