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生猪肉中瘦肉精克伦特罗提取方法研究
沙丁醇胺、莱克多巴胺、克伦特罗等同属瘦肉精,国家禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物,在动物生肉和肉制品中禁止检出。 目前各实验室检测方法和手段都比较多,该药物检测不成问题。因为样品差异,有的提取方法不一定适用所有类型样品,药物提取倒存在一定麻烦。比如我们前几年做的一个项目,生猪肉(瘦肉)中克伦特罗检测,参照标准GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定中高效液相色谱法。 这个实验要做加标回收率验证,要求85%-110%。加标样品要求将20g生猪肉充分粉碎,加入0.1毫升10μg/ml克伦特罗标准品溶液震荡仪震荡至少10min,后超声波超声至少20min,后40℃温度下静止至少24小时。 按国标GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定方法提取。色谱条件色谱柱:C18色谱柱,250mm x 4.6mm,5μm流动相:甲醇:水=45%:55%流速:1ml/min检测波长:244nm柱温箱:30℃进样量:20μl 按该方法我们前处理完成后就检测,检测未加标的样品,结果克伦特罗零含量,未检出。加标样品含量0.1765μg/ml,约8.825μg/kg,加标回收率为17.65%。多次检测,结果基本都这样,相差不大。 后我们将样品前处理进行到超声波超声20min后静止一天后再进行后面的处理。检测未加标的样品,结果克伦特罗仍零含量,未检出。加标样品含量0.3931μg/ml,约19.655ng/kg,加标回收率为39.31%。多次检测,结果也相差不大。 后我们将样品前处理进行到超声波超声20min后静止三天后再进行后面的处理。检测未加标的样品,结果克伦特罗仍零含量,未检出。加标样品含量0.9163μg/ml,约45.815μg/kg,加标回收率为91.63%。多次检测,结果也相差不大,该结果满足加标回收率要求。 这前处理提取效率明显存在问题,最后虽然满足要求但所需时间太长,当然这也许和我们操作手法和实验试剂有关。后我们经过查文献和多次实验摸索,发现一种效果比较好的提取方法。 取一定量生猪肉(瘦肉)充分粉碎后准确称取20g,加入0.1毫升10μg/ml克伦特罗标准品溶液震荡仪震荡至少10min,后超声波超声至少20min,后40℃温度下静止至少24小时,作为待检测加标样品。 用0.5%甲酸水溶液和甲醇以20%:80%混合作为提取液,准确称取5g待检测加标样品,加提取液至20ml,震荡仪震荡5min,超声波超声20min,后恒温水域60℃保持30min,待温度降至30℃-40℃,离心机5000r/min离心10min,取离心后上清液于备用试管中。离心后沉淀物加提取液至20ml重复提取一次,取离心后上清液与第一次上清液合并。 按国标净化和试样测定前的准确方法处理,检测结果,克伦特罗加标样品含量0.4654μg/ml,约46.54μg/kg,加标回收率为93.08%。多次检测,结果相差不大,说明该提取方法可靠。 经过该研究我们发现国标方法虽是通用方法,但针对某些样品国标方法不一定是最理想的方法,选择或研究一种理想的检测方法检测时既省时又省力,结果准确度还有保证。 以上方法可能存在个人操作及实验室条件所限,可能存在一定误差,仅供参考。