主题：【第十五届原创】建立液相质谱联用法测定生姜提取液中米诺地尔、度他雄胺与非那雄胺的含量方法

建立液相质谱联用法测定生姜提取液中米诺地尔、度他雄胺与非那雄胺的含量方法

黄锦波1，罗杰鸿2

(1.吉姆斯（广州）实验技术有限公司；2.广东安纳检测技术有限公司广州  510000)

摘要:目的建立液相串联质谱法测定生姜提取液中米诺地尔，度他雄胺与非那雄胺含量的方法。方法样品经过乙腈溶解，超声15 min，再经过Oasis HLB固相萃取柱净化，最终以甲醇洗脱并定容于10 ml容量瓶。采用电喷雾离子源，全扫描模式，取适量样品上机测试。选择Extend-C18为分离柱，90 %甲醇-0.1 %甲酸水为流动相。结果米诺地尔，度他雄胺与非那雄胺的检出浓度分别为0.020mg/kg，0.019mg/kg，0.022 mg/kg，线性良好，R²均大于0.995。以空白样品为基质，回收率在89.0%-99.8%之间，相对标准偏差在0.5-4.1 %之间。结论该方法的能

Determination ofthree prohibited hormones in hair cosmetics by LC-MS

Huang Jin-bo 1，Luo Jie-hong2

(1.Jims (Guangzhou) Experimental Technology Co., Ltd.; 2. Guangdong Anna TestingTechnology Co., Ltd., Guangzhou 510000)

ABSTRACT: Objective to establish a liquid phase tandem massspectrometry method for the determination of minoxidil, dutasteride andfinasteride in ginger extract. Methods The samples were dissolved inacetonitrile, sonicated for 15min, and then purified by Oasis HLB column.Finally, the samples were eluted with methanol and fixed in a 10 mlvolume-volume flask. Using electrospray ion source, full scan mode, takeappropriate samples on the machine test. Extend-c18 was selected as theseparation column, and 90 % methanol-0.1 % formic acid water was used as themobile phase. Results The detectable concentrations of minoxidil, dutasterideand finasteride were 0.020mg/kg, 0.019mg/kg and0.022mg/kg, respectively, withgood linearity and R² greater than 0.995. Using blank sample assubstrate, the recoveries were 89.0%-99.8%and the relative standard deviationswere 0.5-4.1%. Conclusion This method can accurately analyze the contents ofthree prohibited hormones in ginger extract.

生姜提取液可通过刺激头皮血液，使得毛囊活跃，有助于毛发生长，减少脱发断发^[1]，往往被用作生发原料。米诺地尔或雄胺激素类激素可被用于治疗脱发症状，但根据《化妆品安全技术规范》（2015年版）中规定，米诺地尔或雄胺激素类激素禁止添加到日化用品中，若长期使用含有这三种激素的日化用品，很有可能导致头屑增多、皮肤瘙痒、脱发加剧等^[2]，因此需建立相关的检测方法，以监测相关的产品。

目前，检测米诺地尔，非那雄胺与度他雄胺的主要方法为液相色谱仪^[3-4]、液相质谱联用法^[5-6]。液相色谱仪在检测的过程中对分离条件要求高，不同基质的样品有可能需要开发不同的分离方法，同时容易出现假阳性。液相色谱-串联质谱法，能同时检测几十种激素^[7]，这有利于缩短分析时间，有利于辨别假阳性，因此，在实际工作中，首选液相串联质谱测定激素。

目前质谱法测定米诺地尔与非那雄胺的检测方法相对较多^[8-9]，但是检测度他雄胺的检测方法较少，因此本实验通过优化前处理条件，色谱条件与质谱条件，建立了液相质谱联用测定生姜提取液中米诺地尔、度他雄胺与非那雄胺含量的方法。

1  试验

1.1 仪器和试剂

赛默飞液相色谱质谱联用仪TSQ Quantum Ultra&Access MAX，吉姆斯ZY-1001超声波清洗器、TDL-5A台式离心机。

米诺地尔标准品（纯度为99.5 %）、非那雄胺标准品（纯度为99.7 %）、度他雄胺标准品（纯度为99.9 %）(均购于上海安谱实验科技有限公司)。

样品：市售

试剂：甲醇、乙醇、乙腈均为色谱纯，三氯甲烷为分析纯。

耗材：Oasis HLB固相萃取小柱，Aisimo WAX固相萃取小柱。

1.2  溶液配制

1.2.1 3种激素的混合对照品储备液

分别称取米诺地尔、非那雄胺、度他雄胺对照品适量，用甲醇溶解并稀释成各组分质量浓度分别约为10μg/ml的混合对照品储备液。

1.2.2 3种激素的系列混合标准工作溶液

精密3种激素的混合对照品储备液0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml ，分别置于6只10ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至标线，配制成各组分质量浓度均分别为10、20、40、20、40、60、80、100μg/l的系列混合标准工作溶液，

1.3 仪器工作条件

1）色谱条件  色谱柱：Extend-C18色谱柱（100mm×0.46 cm×0.25 μm），柱温：35℃；进样体积5μl；流速为0.2ml/min。流动相A为甲醇，流动相B为0.1 %甲酸水，等度洗脱，A:B=90 %:10 %。

2）质谱条件电喷雾离子源（ESI⁺），全扫描模式（scan），碰撞气为氩气，雾化气为氮气，雾化室温度：350℃，接口温度为250℃，接口电压为3.5 kV，其余质谱参数见表1。

表1 质谱参数

1.4 试验方法

2  结果与讨论

2.1 色谱行为

图1-1 3种激素的总离子色谱图

图1-2 米诺地尔，非那雄胺与度他雄胺（从左到右）标准溶液的总离子色谱图与相关离子柱状图

2.2.1流动相的选择

本试验以常见的甲醇-0.1 %甲酸水作为流动相，分别设置10 %甲醇-0.1 %甲酸水，30 %甲醇-0.1%甲酸水、50 %甲醇-0.1%甲酸水、70 %甲醇-0.1%甲酸水，90 %甲醇-0.1%甲酸水进行测试，查看各个目标峰的响应值（响应值以同浓度下的峰面积大小判断）。结果发现，流动相的变化，对度他雄胺的响应值无明显影响，但有机相的占比越高，米诺地尔与非那雄胺的响应值越高，因此本试验的流动相采用90 %的甲醇-0.1%甲酸水。

2.2.2 质谱条件的优化

2.4.1提取溶剂的选择

表2 考察不同溶剂作为提取剂的回收率结果

2.4.2 超声时间的确定

图 4 米诺地尔的超声提取时间与回收率的趋势图

图 5 非那雄胺的超声提取时间与回收率的趋势图

图 6 度他雄胺超声提取时间与回收率的趋势图

2.4.3净化条件的选择

表3 3种激素标准曲线考察结果

表4 精密度和回收率实验结果（n=6）

3 总结

参考文献