血液中乙醇分析检验记录表

案件名称及编号： XXX案 XXX

检材接收时间：2022.9.8 检材开始时间：2022.9.13

提取净化操作过程

一、试剂

1.1乙醇对照品标准溶液：

分别精密称取对照品乙醇适量, 用水配成10.0mg/mL乙醇对照品标准储备溶液, 置冰箱中冷藏保存, 保存时间为6个月。（试验中所用其他浓度的对照品标准溶液均从上述储备液用水稀释而得）。

1.2内标物叔丁醇对照品标准溶液：

精密称取叔丁醇适量, 用水配制成5.0mg/mL叔丁醇对照品标准储备溶液, 置冰箱中冷藏保存, 保存时间为6个月。将储备液用水稀释得40ug/mL叔丁醇内标工作液, 置冰箱中冷藏保存, 保存时间为3个月。

1.3乙醇标准溶液配制：

精密仪器取适量乙醇分别配制系列浓度0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL乙醇溶液。

1.4标准曲线制作：

分别取0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL乙醇标准溶液各0.1mL，分别加入0.5mL叔丁醇内标液。按照顶空气相色谱法标准条件分别测定。

二、仪器及器材

2.1气相色谱仪: Agilent 8890 (G3540A)

2.2顶空自动进样器

2.3 10ul微量注射器

2.4 1/10000电子天平

2.5 100～1000uL、10～500uL、10～50uL移液枪各一支

2.6 实验室常用器材

三、检验方法及仪器参考条件说明

3.1参照SF/Z JD0107001-2016血液中乙醇的测定-顶空气相色谱法。

将检材及叔丁醇内标工作液置于顶空小瓶内, 盖上硅橡胶垫。用密封钳加封锅帽, 混匀, 待测。

3.2气相色谱仪参考条件

Agilent 8890 (G3540A)

色谱柱(1): DB - ALC1(30m×0.32mm×1.8μm) 柱；

色谱柱(2): DB - ALC2(30m×0.32mm×1.2μm) 柱；

色谱柱温程: 恒温40℃；

色谱柱: 初始温度70℃, 以50℃/m n程序升温至170℃, 保持5min；

进样口温度: 150℃；

检测器温度: 300℃；

载气: 高纯氮气, 纯度大于等于99.999%；

柱流量: 4mL/min-8mL/min。

3.3顶空自动进样器进样

将样品置于顶空自动进样器样品架上, 顶空自动进样器自动加热、进样。顶空自动进样器参考条件:

加热箱温度: 60℃；

定量环温度: 100℃；

传输线温度: 110℃；

气相循环时间: 5.5min( 色谱柱1、色谱柱2)；

样品瓶加热平衡时间: 10.0min；

样品瓶加压时间: 0.10min；

定量环充满时间: 0.10min；

定量环平衡时间: 0.05min；

进样时间: 1.00min。

四、检材及质控样品制备

血液约10mL（分装在2管中），具塞塑料管包装，检材编号为XXX。

4.1案件样品制备

取待测血液100μL及叔丁醇内标工作液500μL置于顶空小瓶内, 盖上硅橡胶垫。用密封钳加封锅帽, 混匀, 待测。

4.2添加样品及空白样品

取0.01 mg/mL乙醇标准溶液100μL及叔丁醇内标工作液500μL作为检测限添加样品, 另取空白血液100μL及叔丁醇内标工作液500μL作为空白样品。按上述操作与案件样品平行提取和分析。

4.3内标-标准曲线

配制系列浓度0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL的乙醇的对照品标准溶液, 取以上标准溶液100μL各两份，样品制备同4.1。

案件样品中乙醇的浓度应在校准曲线的线性范围内。

4.4定性检出限

取0.01mg/mL、0.03mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL的乙醇的对照品标准溶液, 取以上标准溶液100μL，样品制备同4.1测定定性检出限。

4.4定量检出限

将一定量乙醇加入空白血中配制系列0.01mg/mL、0.03mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL的溶液, 取以上溶液100μL，样品制备同4.1测定定量检出限。

4.4质量控制

将0.198（±0.129）mg/mL浓度的乙醇质控样品进样后，经4.3标准曲线测定后其乙醇浓度为0.202mg/mL，在质控范围内。

4.5进样

将样品置于顶空自动进样器样品架上，顶空自动进样器自动加热、进样。

五.结果评价

分别取空白溶剂、空白对照、案件样品、系列浓度的标准溶液样品、定性检出限样品、定量检出限样品、质量控制样品依次进样分析。（每次进样前均进空白溶剂呈阴性）

（附：检测原始谱图）附图谱目录：

表一：血液中乙醇含量检测原始记录（样品1）

表二：血液中乙醇含量检测原始记录（样品2）

图1：空白对照

图2-13：0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL的乙醇的对照品标准溶液两次进样色谱图

图14-16：标准曲线图

图17：0.198（±0.129）mg/mL乙醇质量控制

图18：样品1平行1色谱图

图19：样品1平行2色谱图

图20：样品2平行1色谱图

图21：样品2平行2色谱图

图22：定性检出限

图23：定量检出限

5.1定性结果评价

添加样品中出现乙醇的色谱峰（图2-13）, 空白对照样品中未出现相应的色谱峰（图1）, 而案件样品1、2中均出现相应的乙醇色谱峰（图18-21）, 且保留时间为1.345min、1.346min（表一、二）与添加样品中乙醇的色谱峰保留时间比较, 相对误差在±2%内。经选择不同的色谱条件，结果一致，可以认定案件样品中含有乙醇成分。经测定乙醇定性检出限为0.01mg/mL。阳性结果可靠。

对照品和内标的保留时间参见表一、二。乙醇校准曲线参见图14-16。

5.2定量结果评价

样品1中乙醇含量为1.12mg/mL，相对相差为0.98%，小于5%，结果可靠。

样品2中乙醇含量为0.68 mg/mL，相对相差为0.59%，小于5%，结果可靠。

经测定乙醇定量检出限为0.05mg/mL。

图谱见18-23，详细数据见表一、二。

5.2质量控制

5.2.1标准曲线：配制乙醇质量浓度为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL的对照品标准溶液, 按4.1步骤进样分析, 以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比(Y) 为纵坐标、乙醇浓度(X)为横坐标进行线性回归。

得线性回归方程Y=0.0452X-0.01399

R=0.99987 R²=0.99974

5.2.2检出限：经测定乙醇的定性检出限均为0.01mg/mL。（图22）

经测定乙醇定量检出限为0.05mg/mL。（图23）

5.2.3质控样品：将0.198（±0.129）mg/mL浓度的乙醇质控样品进样后，经4.3标准曲线测定后其乙醇浓度为0.202mg/mL，在质控浓度范围内，实验结果可靠。

六.检材使用记录

检材保存： 2022年9月13日，取所送检材4mL用于检验。剩余检材置于－4℃冰箱中保存两个月备查。

检材保存负责人：

操作者：

检验完成时间：

表一：血液中乙醇含量检测原始记录

检案号

XXX

样品名称

血液

样品编号

样品1

检测项目

血液中乙醇的定性定量检测

检测方法

SF/Z JD0107001-2016

对照物

40ug/mL叔丁醇

环境温度

22℃

环境湿度

40%

样品处理：1.外观（1）凝血有（）无（√）；（2）密封无渗漏（√）有渗漏（）无密封（）

2.取0.1ml待测血液2份，置于两个样品瓶内，分别加0.5ml内标液，橡胶垫、铝盖密封，进样分析。

仪器操作条件:气相色谱型号：Agilent 8890 (G3540A)

色谱柱(1): DB - ALC1(30m×0.32mm×1.8μm) 柱；

色谱柱(2): DB - ALC2(30m×0.32mm×1.2μm) 柱；

柱温：恒温40℃ 载气：高纯度氮气进样口温度：150℃ 检测器温度：300℃

传输线温度：110℃ 加热箱温度：60℃ 样品瓶加热平衡时间：10.0min 进样时间：1.0min

测定结果：

待测样品1	乙醇峰面积	叔丁醇峰面积	乙醇保留时间	叔丁醇保留时间	结果mg/100mL	结果mg/mL
平行1	84.564	67.833	1.345min	1.994min	111.80	1.118
平行2	79.998	64.817	1.345min	1.994min	110.70	1.107
				结果平均值：	111.25	1.12
				相对偏差：	0.98%

备注：

测试人：XX 日期：2022.9.16

复核人：XX 日期：2022.9.16

表二：血液中乙醇含量检测原始记录

检案号

XXX