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主题：【已应助】请问在线SPE-UPLC-MS/MS单组分方法学开发时条件优化的先后顺序是什么呢

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发表于：2022/10/12 16:59:02 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做单组分主要是用作预实验，但是在看文献的过程中有点搞不懂条件优化的顺序，条件包括，SPE柱的选择、SPE柱的流动相的种类及比例、分析柱的选择、分析柱的流动相的种类及比例、质谱条件……

我的疑惑是，柱子还没确定，怎么去做后面的呢？
我看到文献里，在【优化SPE柱条件】的时候，得用一个确定的流动相条件【后面分析柱的流动相条件】去看峰形是否拖尾来选择保留和吸附能力都比较好的作为后面分析的柱子，那分析柱的流动相条件又是什么时候优化的呢？
其它的条件也是一样，还没确定这个条件的时候，怎么知道要用哪个种类和比例的流动相去做，确定另一个条件呢？
所以不太清楚，实际到底应该怎么做？谢谢！
推荐答案：xiaolanzi5回复于2022/10/12
方法开发一般遵循一个原则，找得到，分得开，跑得快。因此，首先得接二通做质谱条件，而后找个常规c18柱，以常规流动相如甲醇水或乙腈水跑跑试试能不能找到峰，不管加氢还是减氢常规流动相应该都能做出来，只不过灵敏度和峰型等有差异而已。找到峰后，固定流动相条件，可以筛一下不同柱子。柱子确定后再试试不同流动相的表现，包括酸碱性变化，梯度变化等，确定流动相条件。以上是常规参数的方法，有些目标物特殊，做好质谱条件后接柱子找不到峰，这样的得找找相关文献是不是用到特殊的柱子或使用非常规流动相等。
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2022/10/12 22:03:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
未知组分首先要优化好质谱条件，液质流动相可选择有限，一般正离子模式首先考虑0.1%甲酸和乙腈，负离子模式水和乙腈，液相梯度程序一般一个有机相比例低到高的大梯度就可以。SPE的选择可以先查阅一些文献，根据组分性质如酸性可选择阴离子交换柱，碱性可选择阳离子交换柱，还有通用型如HLB C18等，选好spe小柱后可以先用待测组分标样测一下柱效，优化好淋洗 洗脱等程序
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xiaolanzi5
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2022/10/12 22:48:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法开发一般遵循一个原则，找得到，分得开，跑得快。因此，首先得接二通做质谱条件，而后找个常规c18柱，以常规流动相如甲醇水或乙腈水跑跑试试能不能找到峰，不管加氢还是减氢常规流动相应该都能做出来，只不过灵敏度和峰型等有差异而已。找到峰后，固定流动相条件，可以筛一下不同柱子。柱子确定后再试试不同流动相的表现，包括酸碱性变化，梯度变化等，确定流动相条件。以上是常规参数的方法，有些目标物特殊，做好质谱条件后接柱子找不到峰，这样的得找找相关文献是不是用到特殊的柱子或使用非常规流动相等。
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2022/10/13 10:24:47 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
未知组分首先要优化好质谱条件，液质流动相可选择有限，一般正离子模式首先考虑0.1%甲酸和乙腈，负离子模式水和乙腈，液相梯度程序一般一个有机相比例低到高的大梯度就可以。SPE的选择可以先查阅一些文献，根据组分性质如酸性可选择阴离子交换柱，碱性可选择阳离子交换柱，还有通用型如HLB C18等，选好spe小柱后可以先用待测组分标样测一下柱效，优化好淋洗 洗脱等程序
感谢解答！还想请问一下的是，SPE柱和分析柱的流动相条件一般怎么考虑呢？先摸SPE柱的条件，再摸分析柱的条件吗？是不是最好用相同的流动相以减少溶剂效应比较好？分析柱用UPLC的条件该从哪些方面限制对SPE柱可能的损害呢？
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hujiangtao
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2022/10/13 11:20:43 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_10b0ecfd(Ins_10b0ecfd) 发表: 感谢解答！还想请问一下的是，SPE柱和分析柱的流动相条件一般怎么考虑呢？先摸SPE柱的条件，再摸分析柱的条件吗？是不是最好用相同的流动相以减少溶剂效应比较好？分析柱用UPLC的条件该从哪些方面限制对SPE柱可能的损害呢？
SPE和色谱柱流动相选择是两个范畴不用考虑关键性，首先先优化好流动相让目标物有合适的保留时间和响应，SPE属于前处理步骤，一般有机溶剂最后洗脱后氮吹用初始流动相定容
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