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凝胶色谱（GPC）
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主题：【已应助】凝胶色谱GPC标曲、标品问题

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Ins_d4c51abb
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发表于：2022/11/23 17:23:01 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大佬好，我刚接触GPC，还不是很懂。
我在跑的是葡聚糖标品的时候，最大的分子量是302,000，跑这个标品的时候，跑出来是的是平峰，换了几个浓度，峰一直是平的（图1），跑其他分子量的时候就没问题，请教一下大家这是怎么回事？有什么解决办法吗？
这个峰这样，有没有可能是配制过程中标品分子键断裂了？标品配制过程有什么需要注意的吗？我是配完标品放四度过夜了，样品也都完全溶解了。
流动相是水，流速0.6ml/min，标品浓度是1mg/ml。
推荐答案：小不董回复于2022/11/25
从你其他低于这个分子量的标样色谱比较来看，在小一点的标样分离效果是很好的，但这个302k的样品出现了你说的馒头峰，有两种可能，一是样品本身不是很单一，分子量分布就是这样，还有可能就是这个分子量超过了你柱子分离极限，这个你要看看你的柱子分离范围是多少，排阻极限是多少，能否找到能分离更大分子量的柱子来分离。
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小不董
doxw0323
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2022/11/25 10:12:42 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从你其他低于这个分子量的标样色谱比较来看，在小一点的标样分离效果是很好的，但这个302k的样品出现了你说的馒头峰，有两种可能，一是样品本身不是很单一，分子量分布就是这样，还有可能就是这个分子量超过了你柱子分离极限，这个你要看看你的柱子分离范围是多少，排阻极限是多少，能否找到能分离更大分子量的柱子来分离。
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Ins_d4c51abb
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2022/11/25 17:19:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子分离范围是1000到800万，排阻极限是5千万。那这样看的话是标品不纯？
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小不董
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2022/12/6 8:56:45 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_d4c51abb(Ins_d4c51abb) 发表:
柱子分离范围是1000到800万，排阻极限是5千万。那这样看的话是标品不纯？
如果排除柱子的问题，那就是样品的问题，你可以用其他的标准样品来验证你的柱子，或者样品送到其他实验室去测试。
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CMH1025
cheng_hc0032
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2022/12/7 16:43:40 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以用18角度激光光散射仪来测试下，做重均分子量及分子量分布系数测定，有需要联系我们
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tigertooth
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2023/2/2 15:09:51 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有可能是标样本身问题，葡聚糖没有单分散的标样，都是多分散的，分子量大了有可能在样品制备过程会一些问题。我也买过一些标样，也有这样那样的问题，实际测出的和证书上的也有很大差异。
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